[发明专利]一种检测Legumain蛋白判断卵巢癌预后的方法

权利要求书

1.一种检测Legumain蛋白判断卵巢癌预后的方法，其特征在于，一种检测Legumain蛋白判断卵巢癌预后的方法所检测的目标蛋白是Legumain蛋白分子。

2.根据权利要求1所述的一种检测Legumain蛋白判断卵巢癌预后的方法，其特征在于，使用免疫组化的方法检测卵巢肿瘤组织中Legumain蛋白分子的方法，其具体技术方法如下：

1.脱蜡和水化，具体步骤如下：

①组织切片置于二甲苯I中浸泡10分钟，

②组织切片置于二甲苯II浸泡10分钟，

③组织切片置于无水乙醇中I浸泡10分钟，

④组织切片置于无水乙醇II浸泡10分钟，

⑤组织切片置于95％乙醇中浸泡10分钟，

⑥组织切片置于80％乙醇中浸泡10分钟，

⑦组织切片置于自来水中浸泡1分钟，

⑧组织切片置于蒸馏水中浸泡5分钟。

2.抗原修复，将10mM的Citrate Buffer(pH 6.0)通过微波炉，加热10分钟，放入组织切片中低火加热10-15分钟，在室温下晾凉。

3.用超纯水洗处理过的组织切片3次，每次五分钟。

4.将3％双氧水溶液滴加在载玻片上，室温静置10分钟，甩去多余液体。

5.用超纯水洗2次，各五分钟

6.滴加封闭液(正常山羊血清，5％BSA溶液)，在室温下孵育一小时，甩去多余液体。

7.滴加一抗(1∶100)50μL，室温静置1小时。

8.TBST缓冲液洗3次，每次5分钟。

9.滴加二抗(1∶100)50μL，室温静置0.5小时。

10.TBST缓冲液洗3次，每次5分钟。

11.滴加三抗(1∶100)50μL，室温静置0.5小时。

12.TBST缓冲液洗4次，每次5分钟。

13.DAB显色，在显微镜下掌握染色程度，在达到满意效果后放入清水中终止染色，后用自来水冲洗10分钟。

14.苏木精复染20秒，自来水冲洗10分钟。

15脱水、透明，具体步骤如下：

①组织切片置于80％乙醇中浸泡30秒，

②95％乙醇中浸泡3分钟，

③无水乙醇中II浸泡5分钟，

④无水乙醇I浸泡5分钟，

⑤二甲苯II中浸泡5分钟，

⑥二甲苯I浸泡5分钟，

16.树脂封片、镜检。