[发明专利]一种提高磷脂酶活性的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种提高酶活性的方法，尤其是一种提高磷脂酶活性 的方法。

背景技术

神经酰胺(Ceramide)是一种广泛存在于真核生物细胞中的脂类 物质，作为细胞信号转导的第二信使，在介导细胞增殖、分化、细胞 周期阻滞、细胞凋亡、以及细胞衰老等多种生理病理过程中具有广泛 作用，与机体免疫和癌变等有密切关系，近年研究表明，神经酰胺还 具有保湿、抗皱及防止过敏性皮炎的作用，是重要的化妆品原料，能 保护皮肤免于物理，化学和生物的损伤。

神经酰胺是人体代谢中一个非常重要的中间代谢物，具有广泛的 作用，其中包括细胞表达、传递和细胞转变，这些作用反映到生物表 体上，与免疫、癌变等都有密切的联系；另外，由于神经酰胺所具有 的保水特性，使其成为用于护肤品和相关皮肤病治疗药物的关键原 料，现有以化学合成来生产神经酰胺的方法成本极高，产品比黄金价 格还高，从而使如何低成本且高效获得神经酰胺的方法成为该领域的 研究热点。

已有研究证实，采用生物方法利用磷脂酶水解鞘磷脂可获得神经 酰胺。然而由于磷脂酶目前的价格相当高，因此如何提高磷脂酶的活 性以提高神经酰胺的产量、提高反应体系的效率，成为该生物方法能 否实际应用的关键，具有非常重要的生产实践意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种提高磷脂酶活性的方 法。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：

一种提高磷脂酶活性的方法，采用波长为630nm-1064nm的光源 对磷脂酶进行照射。

优选的，上述提高磷脂酶活性的方法，所述波长为640nm-810nm。

优选的，上述提高磷脂酶活性的方法，所述波长为808nm-810nm。

优选的，上述提高磷脂酶活性的方法，所述波长为808nm。

优选的，上述提高磷脂酶活性的方法，所述波长为激光照射产生 或LED光源照射产生，即所述光源为激光光源或LED光源。

优选的，上述提高磷脂酶活性的方法，所述对磷脂酶进行照射的 时间为10-60分钟。

优选的，上述提高磷脂酶活性的方法，所述对磷脂酶进行照射的 时间为10分钟。

优选的，上述提高磷脂酶活性的方法，所述对磷脂酶进行照射的 光源能量在120J/cm²以上。

优选的，上述提高磷脂酶活性的方法，所述对磷脂酶进行照射的 光源能量为120-540J/cm²。

本发明的有益效果是：

所述提高磷脂酶活性的方法，发现采用波长为630nm-1064nm的 光源对磷脂酶进行照射可以显著提高磷脂酶活性，提高反应速度，尤 其是当波长在808-810nm附近时，对磷脂酶照射至少10分钟，对磷 脂酶活性的提高效果最佳，这样便可以通过提高磷脂酶活性进而提高 磷脂酶水解鞘磷脂获得神经酰胺的反应速度，从而提高了单位时间内 神经酰胺的产量，具有非常重要的生产实践意义，适合规模化工业生 产的需要。

附图说明

图1是神经酰胺浓度与反应时间的关系图；

图2是不同波长光源照射对磷脂酶活性的影响示意图。

具体实施方式

为了使本领域的技术人员更好的理解本发明的技术方案，下面结 合附图及具体实施方式对本发明所述技术方案作进一步的详细说明。

实施例1

准备样品

(1)准备鞘磷脂溶液(20mg/ml)，溶剂是氯仿∶甲醇(2∶1)， 用之前在-20℃条件下贮存；

(2)根据总的底物量的需要，适量的以上溶液在N₂下干燥，然 后准备0.4mg/ml的鞘磷脂溶液，有机溶剂是乳酸乙酯∶己烷(50∶ 50)，放在一个超声波振荡器中约10min，使其充分溶解；

(3)该反应所用的酶是CP-PLC(TYPE I)[即，磷脂酶Cl型] (4.6U/mg的固体)，酶溶液在Tris-buffer(Tris缓冲液，包含 25％乙醇，PH＝8.6)中制备，浓度是0.104mg固体/ml(＝0.4784 U/ml)；

(4)200μl的鞘磷脂溶液(底物溶液)和12μl酶溶液在室 温下混合，开始反应，该反应需要振荡器充分振荡，反应时间是10 min；