[发明专利]22个基因座的荧光标记复合扩增检验系统

说明书

技术领域

本发明涉及一种荧光标记复合扩增检验系统，具体涉及通过复合扩增，检测人基因组中21个STR基因座和Amelogenin基因座的荧光标记复合扩增检验系统，该系统可以广泛用于公安部门日常检案、DNA数据库建立、个体识别、亲子鉴定以及考古等方面，有助于解决公安部打拐数据库一子多父母问题和亲子鉴定中突变和近亲鉴定问题。

背景技术

短串联重复序列(STR)是目前普遍应用的遗传标记，由于它具有片段小容易扩增、适宜于检验微量或降解检材、各基因座的扩增条件相似而能够实现复合扩增等特点，因而采用STR的检验系统具有灵敏、准确、快速、信息量大等优点，尤其是在建立DNA数据库方面，STR复合扩增技术具有极大的优越性。因此美国FBI选择了13个STR基因座用于建立DNA数据库——CODIS(Combined DNA Index System)：CSF1PO、D3S1358、D5S818、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、FGA、TH01、TPOX、vWA。这些STR基因座通常被称为13个核心基因座。

正是因为STR基因座具备以上优点和应用前景，许多科研机构和公司投入了大量经费对其进行开发性的研究。国内外已有较多基于STR-PCR技术的荧光检测技术产品：

为了提供一种新的荧光标记复合扩增检验系统，使其更适合于中国人群在个体识别和亲子鉴定等方面的应用，进一步提高系统的累计个体识别力和累积非父排除率，该检验系统中必须包含数目更多的、在中国人群中具有高度遗传多态性的STR基因座。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种22个基因座的荧光标记复合扩增检验系统，用于个体识别和亲子鉴定。为此，本发明者对中国人群中STR基因座的遗传多态性进行了深入的研究，并以此为依据，开发了新的STR基因座的5色荧光复合扩增检验系统，提供对包括Amelogenin在内的22个基因座的分型结果，提高了系统的累计个体识别力和累积非父排除率。该系统单独或与其他商品化试剂盒联合使用，有助于解决公安部打拐数据库一子多父母、亲子鉴定中突变和近亲鉴定问题。

本发明的同时分析人基因组DNA的22个基因座的荧光标记复合扩增系统中，所涉及的22个基因座为：Amelogenin、D6S474、D12ATA63、D22S1045、D10S1248、D1S1677、D11S4463、D1S1627、D3S4529、D2S441、D6S1017、D4S2408、D19S433、D17S1301、D1GATA113、D18S853、D20S482、D14S1434、D9S1122、D2S1776、D10S1435和D5S2500。

本发明的荧光标记复合扩增系统还涉及在一个体系中同时扩增22个基因座，将22个基因座分为四组并分别用四种不同的荧光染料FAM、HEX、TAMRA、ROX进行标记。

本发明的荧光标记复合扩增系统优选的一种分组及荧光染料标记方式为：FAM标记的Amelogenin、D6S474、D12ATA63、D22S1045、D10S1248、D1S1677和D11S4463为一组；HEX标记的D1S1627、D3S4529、D2S441、D6S1017、D4S2408和D19S433为一组；TAMRA标记的D17S1301、D1GATA113、D18S853、D20S482和D14S1434为一组；ROX标记的D9S1122、D2S1776、D10S1435和D5S2500为一组。

本发明所采用的22个基因座分别采用位于该基因座核心重复区两侧的一对引物进行扩增，其中每对引物中有一条引物的5’端进行荧光染料标记；本发明还提供用于复合扩增22个基因座的寡核苷酸引物混合物。

本发明的系统中包括每个基因座的等位基因标准物，以确定待检DNA样品中各个基因座的基因型；本发明的系统中包含的用于鉴别DNA样品性别的基因座是Amelogenin基因座。

本发明的扩增采用聚合酶链式反应进行，扩增产物的检测方法采用多道或单道毛细管电泳。

本发明的荧光标记复合扩增检验系统适用于：人的精斑、唾液斑、组织、血痕或血液等检材来源DNA样品的检测分析。

为实现本发明的上述目的，采用如下技术方案：

一、基因座的确定