[发明专利]携带基于hGluc基因的miRNA传感器的重组AAV病毒库及用途

权利要求书

1.本发明所述的AAV病毒反向感染技术，其技术特征是将重组AAV病毒预先包被并晾干在细胞培养支持物上，以便在加入活细胞悬液时，所包被的AAV病毒能有效反向感染后加入的细胞。

2.依据权利要求1，被预先包在细胞培养支持物上的重组AAV病毒，是被预先设计分布成为AAV病毒阵列，其特征在于将一种或多种重组腺相关病毒(AAV)有序地包被在细胞培养支持物上、晾干制备成可存放的重组AAV病毒阵列产品，所包被的重组AAV病毒在存放过程中仍保持感染细胞的能力。

3.依据权利要求1，被预先包在细胞培养支持物上的重组AAV病毒内的mirT与细胞内miRNA作用而调控重组AAV病毒所携带的报告基因Gluc表达水平，这种重组AAV病毒是具有细胞miRNA活性检测基因传感器作用的重组AAV病毒。

4.依据权利要求3，本发明所述的包装成AAV病毒的、用于细胞miRNA检测的基因传感器的基因组组成元件及顺序为：AAV ITR-(polyA-Fluc-PGK promoter)-Insulator-(CMVpromoter-Gluc-mirT-polyA)-AAV ITR。

5.依据权利要求4，本发明所述的mirT是已知的和新发现的各种miRNA的靶序列，所有的由不同的mirT所包装成的重组AAV病毒共同组成为重组AAV病毒库，称为rAAV-(Fluc)-Gluc-miRNA sensor库。

6.依据权利要求4，基因组组成元件Gluc基因可以是人源化的Gluc基因(hGluc基因)，也可以是天然的Gluc基因。

7.依据权利要求4，本发明所述在AAV病毒的两个ITR之间、Gluc表达盒之外插入了一个独立的、可作为AAV病毒定量的内参照的Fluc基因表达盒，所述的Fluc基因表达盒由启动子、Fluc基因、polyA组成。

8.依据权利要求4，本发明所述在AAV病毒的两个ITR之间、Gluc表达盒与Fluc基因表达盒之间放置绝缘子序列Insulator，以防止两个表达盒之间的干扰。

9.依据权利要求2，本发明所述的AAV病毒基因传感器阵列可用于测定各种干预因素(如各种药物、试剂、理化因素等)对细胞中miRNA活性谱的影响。