[发明专利]旱半夏组织培养快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术工程领域，具体涉及一种旱半夏组织培养快速繁殖技术。

背景技术

半夏[Pinellia ternate(Thunb.)Breit.]属天南星科半夏属植物，以干燥块茎 入药，是一种重要的中药材，具有降逆止吐、燥湿化痰、消痞散结等功能，多用于 治疗痰喘咳、恶心呕吐、眩晕等，近年发现半夏蛋白有抗早孕和抗肿瘤作用，目前 国内全年用量就达5000吨，是多年来紧缺的中药材之一。药用旱半夏几乎都来自野 生，我国虽具有丰富的野生旱半夏种质资源，但由于旱半夏药用和出口需求量大， 造成野生资源日益枯竭难以满足要求，价格持续上扬，居高不下。目前，虽有人工 栽培种植旱半夏可以缓解市场压力，但由于旱半夏生长要求阴湿环境，在灾害性天 气较多的年份，会造成收获量不足的情况，这对旱半夏的生产造成极大限制。另外， 旱半夏连作种植易导致病毒侵染，种性退后，产量和品质下降。因此，考虑使用植 物组培快繁技术进行旱半夏种苗生产并进行人工种植是解决旱半夏资源短缺的有 效途径。

目前，现有技术中未见有完整关于旱半夏外植体选择、愈伤组织诱导、器官分 化诱导、碳源浓度选择的整套组培技术方案的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种旱半夏组织培养快速繁殖方法。利用本发明的方法 对旱半夏进行大规模快繁，以解决旱半夏在天然状态下繁殖困难以及旱半夏资源日 益匮乏问题，实现旱半夏的大规模人工种植，提高旱半夏储量。

为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：

旱半夏组织培养快速繁殖技术，包括以下步骤：

1)配制培养基，基本培养基和其它组培阶段培养基的各组分与每升所含重量 为：

基础培养基：用MS培养基，附加蔗糖15-45g/L，琼脂10g/L，pH5.8；

愈伤组织诱导培养基：MS中添加KT 1.0-3.0mg/L和2，4-D 1.0-3.0mg/L；

分化培养基：MS中添加KT 1.0-3.0mg/L和2，4-D 1.0-3.0mg/L；

增殖培养基：MS中添加KT 0.2-2.0mg/L和2，4-D 0.2-2.0mg/L

生根培养基：MS中添加KT 1.0-2.0mg/L和NAA 0-1.0mg/L；

2)培养无菌苗：将旱半夏块茎灭菌处理后，将其切成5mm大小的小块，接种 在MS+KT 2.0mg/L+2，4-D 2.0mg/L培养基上得到愈伤组织后，移至MS+KT 3.0mg/L +2，4-D 1.0mg/L培养基上使其分化，分化的丛芽切成单芽(包含基部愈伤组织块) 后接种到MS培养基上继续生长得到大量无菌苗；

3)诱导愈伤组织：将步骤2)培养出的无菌苗的叶片、叶柄和愈伤组织块，在 无菌条件下切成5mm大小，接种在愈伤组织诱导培养基上，诱导形成愈伤组织；

4)分化培养：将步骤3)诱导形成的愈伤组织移至分化培养基上使其分化出芽；

5)增殖培养：将步骤4)诱导形成的丛芽切成单芽(包含基部愈伤组织块)移 至增殖培养基上再分化出丛芽；

6)生根培养：将步骤5)增殖形成的单芽(包含基部愈伤组织块)切下，接种 在生根培养基中进行生根培养；

7)移栽：当步骤6)的生根组培苗生长至3-5cm，根数在5根以上时，移栽入 基质，在温室中培养至成苗。

所述步骤2)旱半夏萌发无菌苗的方法是选旱半夏块茎，用75％的乙醇浸泡45s 后，用0.1％的升汞消毒15min，无菌水冲洗5次后接种到培养基上，在温度为25 ℃，光照2000Lx，光周期12h/d下培养30天。

所述步骤7)中栽培基质由腐殖土∶珍珠岩按体积比1∶1配制而成。

本发明旱半夏组织培养快速繁殖技术。可更具体地概括为：