[发明专利]旱半夏组织培养快速繁殖方法

权利要求书

1.旱半夏组织培养快速快繁方法，包括以下步骤：

1)配制培养基，基本培养基和其它组培阶段培养基的各组分与每升 所含量为：

基本培养基：用MS培养基，附加蔗糖15-45g/L，琼脂10g/L，调节pH5.8；

愈伤组织诱导培养基：MS中添加KT 1.0-3.0mg/L和2，4-D 1.0-3.0mg/L；

分化培养基：MS中添加KT 1.0-3.0mg/L和2，4-D 1.0-3.0mg/L；

增殖培养基：MS中添加KT 0.2-2.0mg/L和2，4-D 0.2-2.0mg/L；

生根培养基：MS中添加KT 1.0-2.0mg/L和NAA 0-1.0mg/L；

2)培养无菌苗：将旱半夏块茎进行灭菌处理后，切成5mm的小块，将 其移至MS+KT 2.0mg/L+2，4-D 2.0mg/L的培养基上产生愈伤，其后转入MS+KT 3.0mg/L+2，4-D 1.0mg/L的培养基上使其分化，将产生的丛芽块，再将其切成 单芽块移至MS基本培养基上生长得到无菌苗；

3)诱导愈伤组织：在无菌条件下，将步骤2)培养出的无菌苗的叶片、 叶柄及愈伤组织块切成5mm大小的组织，接种在愈伤组织诱导培养基上，诱导 形成愈伤组织；

4)分化培养：将步骤3)诱导形成的愈伤组织移至分化培养基上使其分 化出芽；

5)增殖培养：将步骤4)生成的丛芽切成单芽，则包含基部的愈伤组织 块，接种至增殖培养基上进行增殖培养，使其再分化出芽；

6)生根培养：将步骤5)形成的丛芽块切成单芽，则包含基部的愈伤组 织块，接种在生根培养基中进行生根培养；

7)移栽：当步骤6)的生根组培苗生长至3-5cm，根数在5根以上时， 移栽入基质中，在温室中培养至成苗。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤2)旱半夏萌发无 菌苗的方法是选旱半夏块茎，用75％的乙醇浸泡45s后，用0.1％的升汞消毒 15min，

无菌水冲洗5次后接种到培养基上，在温度为25℃，光照2000Lx，光周期12h/d 下培养30天，得到无菌苗。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤7)中栽培基质由 腐殖土∶珍珠岩按体积比1∶1配制而成。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述基本培养基和组培各 阶段培养基各组分与每升所含重量为：

1)基本培养基：MS基本培养基，蔗糖15-45g/L，琼脂10g/L，pH5.8；

2)愈伤组织诱导培养基：

以叶柄为外植体时，MS+KT 1.0mg/L+2.4-D 1.0mg/L；

以块茎为外植体时，MS+KT 2.0mg/L+2.4-D 2.0mg/L；

3)分化培养基：MS+KT 3.0mg/L+2.4-D 1.0mg/L；

4)增殖培养基：MS+KT 1.0mg/L+2.4-D 0.3mg/L；

5)生根培养基：MS+KT 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L。