[发明专利]一种重组人单纯疱疹病毒I蛋白HSV I gG及其应用

权利要求书

1.一种重组人单纯疱疹病毒I蛋白HSV I gG的基因片段，其特征在于：它的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.一种重组人单纯疱疹病毒I蛋白HSV I gG，其特征在于：它的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

3.根据权利要求2所述的一种重组人单纯疱疹病毒I蛋白HSV I gG，是由下述方法制备的：

a、人工合成引物：

P1：ACCATATGCAACCCCAACTCCAGACCACCG

P2：ACCTCGAGCCCGCGTTCGGACGGCAGG

b、以人单纯疱疹病毒培养物为模板，PCR扩增，获得基因片段HSV I gG；

c、将基因片段HSV I gG插入表达载体pET-28a中，获质粒pET-28a-HSV I gG；

d、质粒pET-28a-HSV I gG转染埃希氏大肠杆菌BL21(DE3)中，IPTG诱导表达；

f、细菌破碎，蛋白纯化，得重组蛋白HSV I gG。

4.一种重组人单纯疱疹病毒I蛋白IgM抗体检测试剂盒，其特征在于：是以HSV I gG为抗原，标记物为胶体金的IgM抗体胶体金检测试剂盒或标记物为辣根过氧化物酶的IgM抗体酶联检测试剂盒；所述的HSV I gG，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

5.一种重组人单纯疱疹病毒I蛋白IgM抗体胶体金检测试剂盒，是由以下方法制备的：

1)取1.0g的HAuCl₄.H₂O溶解于100ml纯化水中，配成1％氯金酸溶液；取1％氯金酸溶液1ml加入100ml沸水中，加入1％柠檬酸三钠2ml，继续煮沸30min，合成胶体金；

2)取6ml合成的胶体金溶液，在400-700nm处进行扫描检验；取合成的30nm胶体金406ml，用0.1M K₂CO₃调PH至7，量取5mg/ml HSV I gG 2.65ml用PH8.2的20mM Tris-Cl稀释至40ml，边搅拌边加入胶体金溶液，继续搅拌10min，量取1％BSA 40ml，边搅拌边加入，继续搅拌10min，3000r/min 4℃离心10min，去沉淀，上清重新平衡后，12000r/min 4℃离心45min，去上清，重复2次；用质控血清对胶体金复合物进行检验，检验合格后，HSV I gG胶体金复合物在原液至稀释一倍之间、喷金量为25.0μl/cm包被载金垫，然后在37℃、相对湿度30％以下通风干燥16-22小时后切割；

3)预切割NC膜，粘贴背板，浓度2.0mg/ml、划线量为1.0μl/cm包被抗人IgM抗体和按包被浓度为5.0mg/ml、包被量为1.0μl/cm兔抗单纯疱疹病毒I型抗体划线包被于NC膜上，在37℃、相对湿度30％以下的条件下干燥1.0小时；

4)撕掉包被检测线和质控线的带背板NC膜检测线端的纸膜，将HSV I gG胶体金结合物垫粘贴在NC膜的质控线端，交叉约1mm，压实，将裁好的载样垫粘贴在HSV I gG胶体金结合物垫的下端，压实，将裁好的吸水垫粘贴在NC膜的质控线端，将贴好的检测板两端裁切去掉1cm，用切条机切成4mm宽，封装；

所述的HSV I gG，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。