[发明专利]大菱鲆荧光标记微卫星六重PCR家系识别方法

权利要求书

1.一种大菱鲆荧光标记微卫星六重PCR家系识别方法，其特征在于它的方法是：利用6FAM荧光对YSKr01和YSKr19进行标记；利用HEX荧光对YSKr 02和YSKr29进行标记；利用NED荧光对YSKr39和YSKr61进行标记；利用引物设计软件排除这六对引物在PCR反应过程中形成二聚体的可能，组合这六对引物于同一个PCR反应体系中，反应体系中包括ROX荧光分子内标；调整PCR反应体系，建立这六对引物可在同一个PCR反应体系中同时扩增的参数和合适的PCR反应程序；PCR产物经ABI3130基因分析仪根据荧光标记进行大菱鲆六个微卫星位点分析，相同荧光标记的产物通过片段大小进行判断，对大菱鲆不同家系进行区分或者进行个体间及亲子之间的识别和鉴定；

所述的六对微卫星引物序列是：

YSKr01正向序列为5’-3’：CGAGTCAACAGCCATCAAGC，反向序列为5’-3’：AGGTGGTGGACCGTTCAAGT；

YSKr02正向序列为5’-3’：TCGTTGCCGTAGAAACCATC，反向序列为5’-3’：CTGTCTGGAGCCCAAACCT；

YSKr19正向序列为5’-3’：TTGTGGTGCTGTGAATGTGTG，反向序列为5’-3’：AGTGTTATGATATGTGGAGGC；

YSKr29正向序列为5’-3’：GCCTTGCTGTGATTCTTTG，反向序列为5’-3’：AGTGCTGCTTGTCTCTTGTG；

YSKr 39正向序列为5’-3’：GAGGGTTGTTATTGTGGAG，反向序列为5’-3’：GAGGACAAAGTGACGACG；

YSKr61正向序列为5’-3’：CACCTCACTGCCCACTGA，反向序列为5’-3’：TCTGGATGTTTCTCTGACTT。