[发明专利]一种用门多萨假单细胞菌株的提取方法无效

专利信息
申请号: 200910199191.8 申请日: 2009-11-20
公开(公告)号: CN101812416A 公开(公告)日: 2010-08-25
发明(设计)人: 赵晓祥;江晨舟;钭晨;魏俊虎 申请(专利权)人: 东华大学
主分类号: C12N1/20 分类号: C12N1/20;C12R1/38
代理公司: 上海泰能知识产权代理事务所 31233 代理人: 黄志达;谢文凯
地址: 201620 上海市*** 国省代码: 上海;31
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摘要:
搜索关键词: 一种 用门多萨假 单细胞 菌株 提取 方法
【权利要求书】:

1.一种用门多萨假单细胞菌株的提取方法,包括:

(1)提取驯化培养后的水样

取生活污水处理工程生物净化槽-生态强化浮床中提取驯化了7个月后的泥水混合样;

(2)菌株的富集分离和纯化

将驯化了7个月后的泥水混合样静置30min,取上层水样1mL作10-1~10-10的梯度稀释,然后每种稀释浓度分别取1mL菌液于接种到专性脱氮固体培养基进行富集纯化培养,确保长出单一菌株,再接种到斜面培养基,于4℃下保存,备用;

(3)菌株的筛选

将上述菌株按10%的接种量接种于无菌营养肉汤培养基中,于30~34℃、110~120r/min的条件下培养12~16小时,然后按20%的接种量加入到筛选培养基进行唯一碳源的选择实验,最后通过NO3-N的检测得到脱氮率为90.1%的菌株。

2.根据权利要求1所述的一种用门多萨假单细胞菌株的提取方法,其特征在于:所述步骤(2)中的专性脱氮分离培养基为KNO32g/L,K2HPO40.5g/L,MgSO4·7H2O 0.2g/L,蒸馏水1000ml,pH 7.2~7.4,乙酸钠50mmol/L;固体培养基需另加1.8%W/V的琼脂。

3.根据权利要求1所述的一种用门多萨假单细胞菌株的提取方法,其特征在于:所述步骤(2)中的富集纯化培养是指将菌液于接种到专性固体培养基后于30℃培养箱中培养48h,挑取形态清晰的单一菌落,编号,在固体培养基上划线,将培养皿倒置于30℃培养箱中培养48h,,在电子显微镜下观察菌落形态,反复2~4次,确保长出纯的单一菌株。

4.根据权利要求1所述的一种用门多萨假单细胞菌株的提取方法,其特征在于:所述步骤(3)中无菌营养肉汤培养基为牛肉膏3.0g/L,蛋白胨10.0g/L,NaCl 5.0g/L,蒸馏水1000mL,pH=7.0~7.2,斜面培养基为将固体培养基加热溶化,取干净的试管,试管中倒入4~6mL固体培养基,将试管口端放在玻璃棒上,使管内培养基形成斜面而形成。

5.根据权利要求1所述的一种用门多萨假单细胞菌株的提取方法,其特征在于:所述步骤(3)中的筛选培养基是以专性固氮培养基为基础,加入3g/L的乙酸钠、丙酸钠、乙醇、谷氨酸钠、柠檬酸钠、酒石酸钾钠、甲醇、硫代硫酸钠、葡萄糖、碳酸氢钠中的一种作为唯一碳源,调节pH至7.7。

6.根据权利要求1所述的一种用门多萨假单细胞菌株的提取方法,其特征在于:所述的脱氮菌经16S rDNA序列测定和分析比较,鉴定该菌株为门多萨假单胞菌,命名为Pseudomonas MedocinaA-5;菌株的菌落呈淡黄色,圆形,菌落成油滴状有爬延现象。革兰氏染色后用电子显微镜以及扫描电镜观察发现,菌株为杆菌,革兰氏染色反应阴性,单极生鞭毛,半透明。

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