[发明专利]一种用门多萨假单细胞菌株的提取方法无效
申请号: | 200910199191.8 | 申请日: | 2009-11-20 |
公开(公告)号: | CN101812416A | 公开(公告)日: | 2010-08-25 |
发明(设计)人: | 赵晓祥;江晨舟;钭晨;魏俊虎 | 申请(专利权)人: | 东华大学 |
主分类号: | C12N1/20 | 分类号: | C12N1/20;C12R1/38 |
代理公司: | 上海泰能知识产权代理事务所 31233 | 代理人: | 黄志达;谢文凯 |
地址: | 201620 上海市*** | 国省代码: | 上海;31 |
权利要求书: | 查看更多 | 说明书: | 查看更多 |
摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 用门多萨假 单细胞 菌株 提取 方法 | ||
1.一种用门多萨假单细胞菌株的提取方法,包括:
(1)提取驯化培养后的水样
取生活污水处理工程生物净化槽-生态强化浮床中提取驯化了7个月后的泥水混合样;
(2)菌株的富集分离和纯化
将驯化了7个月后的泥水混合样静置30min,取上层水样1mL作10-1~10-10的梯度稀释,然后每种稀释浓度分别取1mL菌液于接种到专性脱氮固体培养基进行富集纯化培养,确保长出单一菌株,再接种到斜面培养基,于4℃下保存,备用;
(3)菌株的筛选
将上述菌株按10%的接种量接种于无菌营养肉汤培养基中,于30~34℃、110~120r/min的条件下培养12~16小时,然后按20%的接种量加入到筛选培养基进行唯一碳源的选择实验,最后通过NO3-N的检测得到脱氮率为90.1%的菌株。
2.根据权利要求1所述的一种用门多萨假单细胞菌株的提取方法,其特征在于:所述步骤(2)中的专性脱氮分离培养基为KNO32g/L,K2HPO40.5g/L,MgSO4·7H2O 0.2g/L,蒸馏水1000ml,pH 7.2~7.4,乙酸钠50mmol/L;固体培养基需另加1.8%W/V的琼脂。
3.根据权利要求1所述的一种用门多萨假单细胞菌株的提取方法,其特征在于:所述步骤(2)中的富集纯化培养是指将菌液于接种到专性固体培养基后于30℃培养箱中培养48h,挑取形态清晰的单一菌落,编号,在固体培养基上划线,将培养皿倒置于30℃培养箱中培养48h,,在电子显微镜下观察菌落形态,反复2~4次,确保长出纯的单一菌株。
4.根据权利要求1所述的一种用门多萨假单细胞菌株的提取方法,其特征在于:所述步骤(3)中无菌营养肉汤培养基为牛肉膏3.0g/L,蛋白胨10.0g/L,NaCl 5.0g/L,蒸馏水1000mL,pH=7.0~7.2,斜面培养基为将固体培养基加热溶化,取干净的试管,试管中倒入4~6mL固体培养基,将试管口端放在玻璃棒上,使管内培养基形成斜面而形成。
5.根据权利要求1所述的一种用门多萨假单细胞菌株的提取方法,其特征在于:所述步骤(3)中的筛选培养基是以专性固氮培养基为基础,加入3g/L的乙酸钠、丙酸钠、乙醇、谷氨酸钠、柠檬酸钠、酒石酸钾钠、甲醇、硫代硫酸钠、葡萄糖、碳酸氢钠中的一种作为唯一碳源,调节pH至7.7。
6.根据权利要求1所述的一种用门多萨假单细胞菌株的提取方法,其特征在于:所述的脱氮菌经16S rDNA序列测定和分析比较,鉴定该菌株为门多萨假单胞菌,命名为Pseudomonas MedocinaA-5;菌株的菌落呈淡黄色,圆形,菌落成油滴状有爬延现象。革兰氏染色后用电子显微镜以及扫描电镜观察发现,菌株为杆菌,革兰氏染色反应阴性,单极生鞭毛,半透明。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于东华大学,未经东华大学许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服】
本文链接:http://www.vipzhuanli.com/pat/books/200910199191.8/1.html,转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇:一种淫羊藿提取物-低聚壳聚糖复合益生菌群培养基
- 下一篇:型煤粘合剂