[发明专利]克林霉素磷酸酯的杂质分析制备方法

权利要求书

1.一种克林霉素磷酸酯的杂质分析制备方法，其特征在于对克林霉素磷酸酯原料进行分析，并从中分离制备所述杂质，包括下列步骤：

a)用LC-MS法测定所述克林霉素磷酸酯原料，根据被分析成分的相对保留时间和/或分子量确定所述原料中的一种或多种杂质；

c)根据步骤a)中所述的一种或多种杂质的相对保留时间所显示的色谱保留行为确定制备色谱法的条件，用制备色谱法收集所述相对保留时间对应的一种或多种杂质。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤a)和c)之间还包括下列步骤：

b)根据步骤a)中所述的一种或多种杂质的相对保留时间和/或分子量确定柱层析法的条件，使用反相硅胶柱层析法富集该相对保留时间和/或分子量对应的一种或多种杂质。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤a)中，所述的LC-MS法测定所采用的流动相pH值为4.00～5.00。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤a)中，所述的LC-MS法测定所采用的柱温为20℃～40℃。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤a)中，所述的LC-MS法测定所采用的流动相包含15％～25％乙腈。

6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤a)中，所述的LC-MS法测定所采用的流动相包含0.1％～0.3％氨水。

7.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤a)中，所述的LC-MS法测定所采用HPLC条件为：

流动相20％乙腈，0.1％氨水；

pH甲酸调pH至4.90；

柱温25℃；

流速1.0ml/min；

检测波长210nm；

色谱柱Diamonsil ODS C18，5μm，250×4.6mm柱。

8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤b)中，所述的反相硅胶柱层析法富集采用的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶填料，流动相为甲醇。

9.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤b)包括：

b1-将样品溶解于去离子水后，湿法上柱；

b2-依次用10％甲醇200ml、20％甲醇200ml、30％甲醇200ml、40％甲醇200ml、50％甲醇200ml、60％甲醇200ml、70％甲醇200ml、80％甲醇200ml、90％甲醇200ml、100％甲醇200ml洗脱；每个浓度梯度分4批接收，每批接收约50ml；

b3-合并收集40％甲醇第4批和50％甲醇第1批的洗脱液备用。

10.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤c)中，所述的制备色谱法所采用条件包括：

流动相15％～25％乙腈，0.1～0.3％氨水；

pH甲酸调pH至4.00～5.00；

柱温：20℃～40℃；

色谱柱Waters μBondapak ODS C18，5μm，7.8mm×300mm柱，或者Agela Venusil ODS XBP C18，5μm，10mm×250mm柱。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，步骤c)中，所述的制备色谱法所采用条件为：

流动相20％乙腈，0.1％氨水；

pH甲酸调pH至4.00；

流速1.0ml/min；

进样量160μl；

检测波长210nm；

色谱柱Waters μBondapak ODS C18，5μm，7.8mm×300mm柱；

收集保留时间为12.848分钟处的峰相对应的被分析物。

12.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，步骤c)中，所述的制备色谱法所采用条件为：

流动相22％乙腈，0.1％氨水；

pH甲酸调pH至4.00；

流速1.0ml/min；

检测波长210nm；

色谱柱Agela Venusil ODS XBP C18柱，5μm，10mm×250mm柱；

进样量120μl；

收集保留时间为14.9分钟处的峰相对应的被分析物。