[发明专利]抗体的体外检测方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗体的检测方法，尤其涉及一种抗体的体外检测方法。将该方法应用于检测乙肝病毒E抗体后，能使检测结果更直观、更准确，还能对血清中乙肝病毒E抗体进行定量。

背景技术

乙型(病毒性)肝炎是由乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)引起的一种世界性疾病。发展中国家发病率高，据统计，全世界无症状乙肝病毒携带者超过2.8亿。我国约占9300万，大多数人无症状，但其中的1/3会出现肝损害的临床表现。

目前通过三种途径对乙型肝炎进行诊断，如：检测病毒的抗原、检测体内抗体以及检测病毒的DNA。临床上，通常使用五种标识物进行判断，如：乙肝表面抗原(hepatitis B surface antigen，HBsAg)、乙肝表面抗体(antibodies to hepatitis B surface antigen，HBsAb)、乙肝e抗原(hepatitis B E antigen，HBeAg)、乙肝e抗体(antibodies to the′e′antigen，anti-Hbe/HBeAb)和乙肝核心抗体(antibodies to the core antigen，anti-Hbc/HBcAb)，又称“两对半”。乙肝病毒DNA则用来诊断和观察慢性乙型肝炎。当血液中病毒DNA数量稳定或增加较少时，说明病情较为稳定；当病毒DNA数量不断增多，则说明病情正在恶化。

HBsAg出现于乙肝患者血清中谷丙转氨酶升高之前，直至恢复期时，HBsAg的滴度才会逐步降低乃至消失，但有部分患者HBsAg可持续存在。在绝大多数乙肝病毒感染者的外周血中，含有5ng-600μg/ml的HBsAg。血清中的HBsAg仅仅是个体受到HBV感染的标志，并不反映病毒复制与否、病毒复制程度以及病毒的传染性强弱等。急性乙肝病人恢复期后，随着HBsAg逐步降低乃至消失，血清中会出现对HBV感染具有保护性免疫作用的HBsAb。一般情况下，血清中的HBsAb和HBsAg不会被同时检出。

HBV的前核心(pre-core)/核心(core)基因直接编码两种多肽，其为组成病毒核壳体的21kD亚基p21c和经分泌过程产生的17kD亚基肽p17e(切去定位于内质网的29个氨基酸的pre-core信号肽)。p21c即为血清学上定义的HBcAg，p17e即为血清学上定义的HBeAg。也有文献报道在血清分离出带有-10--1前核区段的HBeAg(Virology 1988，163，268-275)和含有全部29个氨基酸的HBeAg(J.Immunol.，1991，147，3156-3160)。HBeAg和HBcAg约有75％的同源性，其在血清中的出现时间稍晚于HBsAg。一般情况下，若HBeAg检测为阳性时，HBsAg检测亦为阳性，HBeAg阳性结果还表明病毒的传染性强。若这种情况持续3个月以上，则有慢性化倾向。当血清中的HBeAg标识物检测结果为阴性后，体内会出现HBeAb。血清检测HBeAb阳性结果表明病毒复制减少，传染性减弱。因此，对乙肝病人血清中HBeAg和HBeAb标识物的准确测定对乙型肝炎的诊断、预防和治疗具有重要的指导作用。

HBcAb是判断乙肝病情的重要指标。随着急性乙肝的恢复，HBcAb滴度会降低乃至消失。若该标识物在血清中持续高滴度，则表明乙肝病情有向慢性化发展的倾向。在慢性乙肝患者中，HBcAb的检出率及滴度较高说明乙肝病毒复制活跃，还表明了病毒的传染性强。

在乙肝的临床诊断和治疗过程中，通常采用将HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb等五种标识物中的几种相结合的方式来判断乙肝病情。若病人血清中HBsAg、HBeAg和HBcAb三种标识物检测均为阳性时，就可以确定该患者正受到乙肝病毒感染，且病毒正在活跃复制，病毒数量较多，传染性也较强。若病人血清中HBsAg、HBeAb和HBcAb三种标识物检测均阳性时，表明乙肝病情好转，病毒复制数量减少。