[发明专利]一种肝癌风险基因测评方法及套组

权利要求书

1.一种肝癌风险基因测评方法及套组，包括步骤：

(1)提取受检者样本DNA；

(2)对样本DNA进行目的基因的PCR扩增、纯化、片段化及荧光素标记，所述目的基因包括CDC6、CTLA-4、CYP1A1、CYP1A2、DLC1、GRP78、HSPA1B、IL-18、IL-1β、MDM2、MIR-146A、MTHFR、MTRR、TGF-β1、TNF-α和TP53基因；

(3)荧光素标记的PCR产物进行基因芯片杂交，检测目的基因的SNP位点，得到基因分型结果。

(4)根据步骤3)得到的基因分型结果，分析受检者肝癌的风险率。

2.如权利要求1所述的肝癌风险基因测评方法及套组，其特征在于：所述步骤(2)中的CDC6基因的引物是SEQ ID NO：41～42所示序列的引物，CTLA-4基因的引物是SEQ IDNO：43～44所示序列的引物，CYP1A1基因的引物是SEQ ID NO：45～52所示序列的引物，CYP1A2基因的引物是SEQ ID NO：53～54所示序列的引物，DLC1基因的引物是SEQ IDNO：55～56所示序列的引物，GRP78基因的引物是SEQ ID NO：57～58所示序列的引物，HSPA1B基因的引物是SEQ ID NO：59～60所示序列的引物，IL-18基因的引物是SEQ IDNO：61～62所示序列的引物，IL-1β基因的引物是SEQ ID NO：63～64所示序列的引物，MDM2基因的引物是SEQ ID NO：65～66所示序列的引物，MIR-146A基因的引物是SEQID NO：67～68所示序列的引物，MTHFR基因的引物是SEQ ID NO：69～70所示序列的引物，MTRR基因的引物是SEQ ID NO：71～72所示序列的引物，TGF-β1基因的引物是SEQID NO：73～74所示序列的引物，TNF-α基因的引物是SEQ ID NO：75～78所示序列的引物，TP53基因的引物是SEQ ID NO：79～80所示序列的引物。

3.如权利要求1所述的肝癌风险基因测评方法及套组，其特征在于：所述步骤(2)中的片段化是将纯化的PCR产物经浓度测定后，用DNase I进行片段化；所述荧光素标记是将片段化PCR产物利用脱氧核苷酸转移酶在3’末端进行荧光素标记。

4.如权利要求1所述的肝癌风险基因测评方法及套组，其特征在于：所述步骤(3)基因芯片的制备是将预先设计并合成好的探针通过接触式点样或喷墨式点样点载到玻片或硅片材质的固相载体片基上，其中，探针是SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：40所示序列的DNA探针。

5.如权利要求1所述的肝癌风险基因测评方法及套组，其特征在于：所述步骤(3)目的基因的SNP为点包括：CDC6基因的rs4134994位点，CTLA-4基因的rs23.1775位点，CYP1A1基因的rs4646421、rs2198843、rs4886605和rs1048943位点，CYP1A2基因的rs2069514位点，DLC1基因的rs621554位点，GRP78基因的rs430397位点，HSPA1B基因的rs1061581位点，IL-18基因的rs187238位点，IL-1β基因的rs1143627位点，MDM2基因的rs2279744位点，MIR-146A基因的rs2910164位点，MTHFR基因的rs1801131位点，MTRR基因的rs1801394位点，TGF-β1基因的rs1800469位点，TNF-α基因的rs1799724和rs361525位点及TP53基因的rs1042522位点。

6.如权利要求1所述的肝癌风险基因测评方法及套组，其特征在于：所述步骤(4)中的基因分型结果导入肝癌评估软件进行受检者肝癌风险指数和风险率评估。

7.如权利要求1或6所述的肝癌风险基因测评方法及套组，其特征在于：所述肝癌风险指数评估标准：一个易感基因为+1分；一个保护基因为-1分；无易感基因和保护基因为0分；60岁及以上+3分；肿瘤家族史为+2分；HBV感染+3分；其中，易感基因是指增加个体肝癌风险性的基因，其比数比大于1；保护基因是指降低个体肝癌风险性的基因，其比数比小于1。

8.如权利要求7所述的肝癌风险基因测评方法及套组，其特征在于：所述风险率评估标准：肝癌风险指数1～3分，个体患肝癌的风险为中度；肝癌风险指数4～6分，个体患肝癌的风险为高度；肝癌风险指数6分以上，患肝癌的风险为极高度。