[发明专利]一种单增李斯特菌溶血素O的原核表达及纯化方法无效
| 申请号： | 200910197413.2 | 申请日： | 2009-10-20 |
| 公开（公告）号： | CN101691582A | 公开（公告）日： | 2010-04-07 |
| 发明（设计）人： | 唐雪明;孙晓飞;赵凯;朱宏;吴潇;谭芙蓉;王金斌;陶世如;蒋玲曦 | 申请（专利权）人： | 上海市农业科学院 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12P21/02;G01N33/68;C12R1/19;C12R1/01 |
| 代理公司： | 上海开祺知识产权代理有限公司 31114 | 代理人： | 费开逵 |
| 地址： | 201106 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 李斯特 溶血 表达 纯化 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种单增李斯特菌溶血素O的原核表达方法，包括以下步骤：
1)根据NCBI上登录的单增李斯特菌的基因序列，以及所要连接的载体PMD 18-T的多克隆位点设计引物，进行PCR扩增、电泳和回收，并对该PCR回收物进行DNA连接反应；
2)大肠杆菌感受态细胞的制备和转化；
3)碱法小量制备质粒DNA；
4)表达质粒的重组构建、重组菌的诱导表达。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述引物序列如下：正向引物Hly-F：5’-GCGTCGAC(SalI)CCAATTGCGCAACAAACTGA-3’反向引物Hly-R：5’-CCCTCGAG(Xho I)TTTTGCGGAACCACCGTAA-3’。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述大肠杆菌感受态细胞为E.coli DH5α和E.coilBL21(DE3)。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，通过Ni-NTA亲和层析进行表达蛋白的进一步纯化。
5.根据权利要求1所述的单增李斯特菌溶血素O蛋白在金标速测卡中的应用。
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