[发明专利]一种均相多指标荧光/化学发光测定方法及其用途

说明书

技术领域

本发明属血液检验领域，涉及荧光/化学发光同时检测新技术，具体涉及一种均相多指标荧光/化学发光测定方法及其用途。尤其涉及一种肿瘤等重大疾病多种血清标志物荧光/化学发光同时检测技术。

背景技术

流行病学研究提示，我国不仅肿瘤死亡率呈明显上升趋势，而且兼有发展中国家和发达国家高发并存的特点，主要原因有四点：(1)人口老年化。50年前我国人均寿命49岁左右，而现在为70多岁，非常接近发达国家水平，老龄化导致老年性疾病自然增多；(2)工业化发展。随着工业化的进展，环境污染等影响加剧，癌症发病率增高；(3)农村的城市化随着农村向城镇化发展，生活节奏越来越紧张，饮食结构明显改变，不健康饮食增多，导致癌症发病率增高；(4)不良的生活习惯如吸烟和不良饮食等。统计表明：中国每年癌症新发病例约为220万人，因癌症死亡人数为160万人。近20年来，每4-5个死亡者中就有一个死于癌症，居死亡原因之首。卫生部肿瘤防治办公室提供的2006年我国肿瘤发病率和十大恶性肿瘤发病率排序显示：肺癌、乳腺癌分别位居男、女性恶性肿瘤发病首位，男女恶性肿瘤死亡率最高的均为肺癌。据预测，到2020年，中国也将有550万新发癌症病例，其中死亡人数将达400万。

目前，肺癌等重大疾病的临床诊断方法主要有：X线检查、活检、纤维支气管镜检查、CT、MRI以及痰细胞学检查等。实践显示，活检，纤维支气管镜检查均为创伤性诊断方式，对患者身体及组织有一定程度的损伤，且有人群局限性。CT和MRI检测费用相对昂贵，且地方性医院不具备该类设施。痰细胞学检查为非常规类检查，患者往往在出现明显的症状后才进行该类检查，容易贻误早期诊断时机。因此，发展快速、费用低、灵敏度高、特异性好的无创性早期诊断新技术，特别是血清学的诊断技术，近年来已成为临床上颇为关注的热点研究领域。

现代医学的研究成果表明：血清中包含的多种肿瘤标志物如癌胚抗原(CEA)、细胞角质素片断19(Cyfra21-1)为早期非小细胞肺癌诊断的主要标志物，其中患者血清Cyfra21-1值与肺癌的进展程度和组织学分型相关，其广泛存在于内胚叶起源的消化系统癌，也存在于正常胚胎的消化管组织中，在正常人血清中也可有微量存在。癌胚抗原(CEA)是一个广谱性肿瘤标志物，能反映出多种肿瘤的存在，实践显示，对大肠癌、乳腺癌和肺癌的疗效判断、病情发展、监测和预后估计是一个较好的肿瘤标志物，但其特异性不强，灵敏度不高，对肿瘤早期诊断作用不明显。神经元特异性烯醇化酶(NSE)为早期小细胞肺癌(SCLC)诊断的主要标志物，血清NSE是神经原和神经内分泌细胞所特有的一种酸性蛋白酶，神经内分泌肿瘤的特异性标志物，如神经母细胞瘤、甲状腺髓质癌和小细胞肺癌(70％升高)，可用于鉴别诊断、病情监测、疗效评价和复发预报。上述肿瘤标志物主要存在于肺癌患者血清中，已分别应用于肺癌等重大疾病诊断。但大量的临床数据表明：单一肿瘤标志物存在着特异性不强的弊端，特别是对早期肿瘤的检测率不高，临床实践中常不得不采用多个标志物分别检测、联合分析的方法来提高肿瘤检测的敏感性。但是，每种标志物都需要一种放射或酶联免疫试剂盒，直接导致这些多指标检测方法普遍存在所需血清用量大、检测时间长、诊断费用高、操作复杂等不足，从而限制了它们在临床上的应用。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术检测标志物单一，实验周期长，血清用量大，诊断费用高的不足，提供一种均相多指标荧光/化学发光测定方法，尤其涉及一种肿瘤等重大疾病多种血清标志物荧光/化学发光同时检测技术。

本发明采用聚苯乙烯微球上固定多种特异性识别单克隆抗体，用来与癌胚抗原CEA、细胞角质素片断19Cyfra21-1、神经元特异性烯醇化酶NSE和其它多种癌症标志物结合，然后与多种不同半抗原修饰的标记抗体进行夹心反应；随后与对应半抗原抗体修饰的辣根过氧化物酶、碱性磷酸酯酶和量子点反应，结合化学发光和荧光等检测手段在同一台仪器上进行多种标志物同时测定。

具体而言，本发明方法一种多种血清标志物荧光/化学发光同时检测方法，可以同时检测多种肿瘤标志物。其特征在于，使用聚苯乙烯微球作为载体结合多种肿瘤标志物的包被抗体，与标准溶液或者血清样品中的相应多种标志物结合后，与分别制备的标记抗体结合，然后与抗地高辛ALP，抗FITC HRP和链酶亲和素量子点等标记物或者其他多种标记物结合，最后进行化学发光测定或者直接进行荧光测定。