[发明专利]蛋白质酶的微水介质固定化方法

权利要求书

1.一种蛋白质酶的微水介质固定化方法，其特征在于，包括以下步骤：

A．蛋白质酶的预处理：将拟固定化的蛋白质酶置于具备该蛋白质酶酶活力的最适缓冲液条件的缓冲液中，冻干备用；所述蛋白质酶为辣根过氧化物酶，所采用的缓冲液为pH 7.0、0.2 mol/L磷酸盐缓冲液； 

B．固定化载体的活化：采用壳聚糖微球为固定化载体，其活化方法如下：称取2.5 g脱乙酰度为85~90%的壳聚糖粉末加入到99 mL 蒸馏水中，磁力搅拌10 min，然后再加入1 mL 冰乙酸，室温下搅拌混合3 h，纱布过滤，收集滤液，制成浓度为2.5% 的壳聚糖溶液，注入到含有10% 的NaOH (W/V) 和16.67%的95%乙醇 (V/V) 的凝结液中，形成2 mm左右的壳聚糖微球，过滤收集壳聚糖珠，用蒸馏水洗涤至中性，制成壳聚糖微球；

C．微水有机介质的制备：所采用的有机介质为非水溶性并能使所述的微水蛋白质酶在该溶剂内仍可保持其活性的有机溶剂，该有机溶剂为1，4-二氧六环；将该有机溶剂制成含水量为0.4%~1.2% 的微水有机溶剂，即为固定化酶所使用的微水有机介质；

D．将步骤A得到的蛋白质酶置于步骤C所制备的微水有机介质中，与步骤B已活化的载体进行共价交联固定化，去除微水有机介质后，即得到微水介质固定化酶。