[发明专利]一种温度敏感角膜上皮细胞培养材料的制备方法与应用

权利要求书

1.一种温度敏感角膜上皮细胞培养材料的制备方法，其特征在于所述制备 方法是：合成N-异丙基丙烯酰胺/丙烯酸的叠氮苯胺衍生物，再将N-异丙基丙烯 酰胺/丙烯酸的叠氮苯胺衍生物通过紫外光化学接枝法固定在组织培养用聚苯乙 烯板上，其中，所述N-异丙基丙烯酰胺/丙烯酸的叠氮苯胺衍生物的合成方法如 下：

(1)将N-异丙基丙烯酰胺单体和丙烯酸单体按照95∶5的摩尔比例溶于异 丁醇，置于三口烧瓶中，同时加入链转移剂3-巯基丙酸和磁力搅拌子，三口烧 瓶与氮气和冷凝管相通，通入氮气10min后，再加入引发剂偶氮二异丁腈，在 密封条件下搅拌，进行水浴反应24h；

(2)以甲醇稀释上述反应所得溶液，加入乙醚中沉淀；

(3)用蒸馏水洗涤沉淀2～3次后，风干干燥，得到N-异丙基丙烯酰胺/丙 烯酸共聚物；

(4)将N-异丙基丙烯酰胺/丙烯酸共聚物、4-叠氮苯胺盐酸盐和1-乙基-3- (3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐混合，溶于2-(N-吗啉基)乙磺酸中， 于4℃暗反应30h；

(5)反应结束后，将反应液离心，用MES洗涤沉淀至洗涤液中不含叠氮 苯甲酸时，得到N-异丙基丙烯酰胺/丙烯酸的叠氮苯胺衍生物；

上述步骤(1)中所述搅拌转速为90R/min，水浴反应的温度为60℃；

步骤(4)中所述N-异丙基丙烯酰胺/丙烯酸共聚物的质量为10mg，4-叠氮 苯胺盐酸盐的质量为21.36mg，1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸 盐的质量为47.92mg；

所述将N-异丙基丙烯酰胺/丙烯酸的叠氮苯胺衍生物通过紫外光化学接枝法 固定在聚苯乙烯板上的方法为：将N-异丙基丙烯酰胺/丙烯酸的叠氮苯胺衍生物 经冰浴溶于MES中，滴加至聚苯乙烯板上，干燥；125W的紫外灯在10cm处 照射10min后，N-异丙基丙烯酰胺/丙烯酸的叠氮苯胺衍生物就已固定在聚苯乙 烯板上；

所述聚苯乙烯板为组织培养用聚苯乙烯24孔板，每个孔中滴加的溶于MES 中的N-异丙基丙烯酰胺/丙烯酸的叠氮苯胺衍生物的体积为20μl；所述MES的 用量为pH5.5，浓度为0.1Mmol/L的1ml MES；所述干燥温度为4℃。

2.权利要求1所述温度敏感角膜上皮细胞培养材料的制备方法制得的温度 敏感角膜上皮细胞培养材料的应用，其特征在于所述温度敏感角膜上皮细胞培 养材料用于培养人角膜上皮细胞；培养膜上皮细胞包括如下步骤：

(1)用含体积百分数为15％DMEM高糖培养基悬浮人角膜上皮细胞，接 种于接枝有N-异丙基丙烯酰胺/丙烯酸的叠氮苯胺衍生物的聚苯乙烯培养板孔 中；

(2)将组织培养用聚苯乙烯培养板置于37℃、5％CO₂细胞培养箱中培养。