[发明专利]UGT1A1基因多态性检测的方法及液相芯片

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体的是涉及UGT1A1基因多态性检 测液相芯片及其检测方法。

背景技术

伊立替康(Irinotecan，CPT-11)是一种通过抑制DNA拓扑异构酶I起抗癌作用的化疗 药物，于1998年获得美国FDA批准上市。在DNA复制过程中，拓扑异构酶I可逆性地切开 DNA单链，并重新组装形成DNA双链。伊立替康的活性代谢物SN-38与拓扑异构酶IDNA复 合物结合，阻止DNA链的重新组装，引起DNA双链的断裂，造成细胞死亡。

然而，伊立替康引起的嗜中性粒细胞的减少和严重肠毒性问题，成为限制其用药剂量的 关键因素之一。伊立替康的活性代谢物SN-38经肝脏尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UDP-GT) 灭活(主要由UGT1A1、UGT1A7和UGT1A9代谢)，从而保护健康细胞免受细胞毒性的影响。科学 研究表明，伊立替康的毒副作用与UGT1A1的基因多态性密切相关。UGT1A1的三种常见等位基 因型UGT1A1*28、UGT1A1*6和UGT1A1*93会导致该酶的功能减弱，从而使药物活性代谢物在血 液中停留时间延长。

UGT1A1*28是启动子TATA盒突变。UGT1A1*28的杂合子和野生型的酶活性相似，但 UGT1A1*28的突变纯合子对应的酶活性仅是野生型的35％。该位点正常纯合子为6个重复的 TA碱基对A(TA)₆TAA(6/6)，突变纯合子为7个重复的TA碱基对A(TA)₇TAA(7/7)，突变杂 合子基因型的等位基因中，一个为野生型，一个为突变型(6/7)。不同基因型的UGT1A1携带 者，在接受伊立替康治疗时产生毒副作用的几率不同。野生型UGT1A1(6/6)在接受伊立替 康治疗时不会产生毒副作用，而突变型杂合子(6/7)产生毒副作用的几率为12.5％，突变 型纯合子(7/7)则有50％的几率产生毒副作用。在亚洲人中，UGT1A1基因各基因型的发生 频率分别是6/6型约占70.2％，6/7型约占27.7％，7/7型约占2.1％。因此，2005年美国 FDA批准更新伊立替康的产品说明书，要求在警示信息中标明服用者的遗传差异将影响其对 该药物的反应，提示用药前应进行UGT1A1*28检测。

UGT1A1*93是启动子上的点突变(-3156G＞A)，UGT1A1*6是外显子1上的点突变(211G＞A)。 临床研究发现，具有-3156G基因型的患者只有12.5％出现毒性副作用，而-3156A基因型的患 者，有50％在接受伊立替康治疗后出现副作用，而且出现毒副作用的时间也显著较早。 UGT1A1*93在东亚人群中的分布频率约为9％。UGT1A1*6基因型的SN-38G与SN-38的AUC(血 药-时间下曲线面积)之比显著低于野生型，且UGT1A1*6基因型患者接受伊立替康治疗后的 无进展生存率和总生存率都显著下降。UGT1A1*6在东亚人群中的分布频率约为13.6％。

目前国内外已有多个检测UGT1A1*28等位基因型的产品上市，如Third Wave，Genelex、 Genzyme、LabCorp、上海申友生物和上海天昊生物等。但未有联合检测UGT1A1这三个基因位 点的产物。目前市场上的产品主要建立在以PCR为基础的检测技术，如直接测序法，PCR-单 链构象多态性分析(SSCP)检测，这些技术存在灵敏度低，样品易污染、假阳性率高的缺点， 普通PCR方法和荧光定量PCR由于检测通量的局限性不能满足临床的需要。而聚合酶链式反应 -限制性片段长度多态(PCR-RFLP)分析技术和基于TaqMan技术的等位基因差异分析法一次 只能进行一种突变的检测，耗时费力。