[发明专利]一种消减黄连自毒物质的微生物菌种筛选方法

权利要求书

1、一种消减黄连自毒物质的微生物菌种筛选方法，其特征在于：具体步骤如下：

1)样品采集：用无菌土样袋采集4～5年植龄，长势健壮黄连的根际土壤；

2)增菌培养：将根际土壤放入20℃～25℃培养箱中培养5～7天，无菌水制成1％的悬浮液；

3)菌种筛选：将悬浮液采用划线接种PDA培养基平板中，并培养，培养温度18℃～25℃，培养时间5～7天；挑取不同形态的微生物菌丝纯化培养，将纯化的菌落移接于PDA斜面培养基中，1～5℃冰箱保存待用；

4)、消减效果评价：采用PDA培养基平板培养，实验组接种纯化菌种，对照组不接菌，18℃～25℃条件下培养7～8天，取样进行HPLC检测，选取消减效果最好的菌株，放大培养。

2、根据权利要求1所述的消减黄连自毒物质的微生物菌种筛选方法，其特征在于：步骤4)HPLC检测条件为：用打孔器取10g菌饼，加入甲醇50ml，超声提取30min，补足重量，过滤检测。色谱柱为：C₁₈柱，4.6×250mm，5μm；流动相为：乙腈∶50mmol/L磷酸二氢钾溶液＝50∶50，加15mmol/L十二烷基硫酸钠，再以磷酸调节pH为4.0，柱温30℃，流速0.6ml/min，检测波长345nm 。

3、根据权利要求1所述的消减黄连自毒物质的微生物菌种筛选方法，其特征在于：PDA培养基平板或PDA斜面培养基的配方为：水1000ml，200g马铃薯，10～20g葡萄糖，17-20g琼脂，10～15g黄连根茎粉末。