[发明专利]几丁聚醣作为传输工具的应用和方法

说明书

技术领域

本发明关于一种几丁聚醣的基本组成制成的几丁聚醣奈米微粒作为经由皮肤传输工具的应用与方法。

背景技术

目前所知的脱氧核糖核酸(DNA)疫苗的传递通常通过肌肉注射和基因枪轰击金微粒到皮肤(例如Chen et al.，J Virol 73：10137-45(1999)的论文中便有提及相关技术)，且DNA覆盖在金微粒上并通过直接轰击的方式进入至细胞的细胞质及细胞核中，藉以达到促进其编码蛋白质表现的效果，也因此基因枪通常使用高压氦气以传递覆盖有DNA的金微粒使其穿过表皮的角质层(此技术揭露在Bellhouse et al.，US 5,899,880的专利说明书中)。不过，由于高压基因枪的轰击具有较高的成本，其因在在高压基因枪的操作需要通过技术较为纯熟的操作手法并配合上具有非降解性的金微粒方可达到较佳的实施效果，不过，根据目前的文献(Lin et al.，Mol Ther 13：S291(2006))显示，基因枪所普遍使用的非降解性金微粒却可能因产生体内堆积等情况而导致不良的副作用。

是以，目前生物技术领域中，积极地研究无针剂疫苗直接以皮肤作为DNA疫苗免疫管道，以期可达到方便、简单，并同时提高其安全性，而在目前常见的无针剂疫苗中较可行的方式为以贴布形式经皮传输抗原作为疫苗，通过皮肤具有大量免疫部位且存在大量抗原呈现细胞的特征而得以达到较佳的效果，更详细来说，经皮免疫可引起广大的免疫反应是因为存在表皮层和真皮层中的朗格汉细胞和树突细胞(如Romani et al.，J Exp Med 161(6)：1368-83(1985)；Berry et al.，Infect Immun 72(2)：1019-28(2004)的研究论文中均有相关叙述)。另外，在许多的研究中，抗原经由皮肤传递的原理是一些佐剂或它们的次单位被使用在贴布和其它引起巨大免疫反应的传递基础，其中一般常使用的佐剂有霍乱毒素、绿脓杆菌外毒素、黏膜黏液素A、大肠杆菌中忌热性肠毒素以及它们突变的次单位(可参酌Kersten et al.，Infect Immun；68(9)：5306-13(2000)的技术论文)，由于上述的佐剂可诱发局部专一性T细胞粘膜免疫反应对抗毒素或共同所传递的抗原(可参酌Freytag et al.，Curr Top MicrobiolImmunol 236：215-36(1999)的技术论文)，但上述公知的经皮传递技术均各有其困难点而较不可能应用在未来临床使用。也因此，为了克服上述传统技术缺点，本发明以几丁聚醣作为传输工具的方法减轻和消除上述的问题。

发明内容

发明的主要目的是提供以几丁聚醣为基本组成的几丁聚醣奈米粒子为传输工具，并形成几丁聚醣-脱氧核醣核酸复合体及几丁聚醣-蛋白质复合体以装载脱氧核糖核酸或蛋白质。本发明为几丁聚醣奈米粒子为经皮传输的工具，当几丁聚醣-脱氧核醣核酸复合体通过贴布及低压基因枪由皮肤传递而引起免疫反应。

本发明可采用以下技术方案来实现的。

本发明的一种制作几丁聚醣作为传输工具的方法，其特征在于几丁聚醣是奈米级粒子，且几丁聚醣是纯度至少去乙酰度81％以上的几丁聚醣作为原料，所述方法包括下列步骤：以1％(w/v)在167mM醋酸溶解几丁聚醣产生几丁聚醣溶液；调整几丁聚醣溶液的酸碱度介于pH 4.0-6.0；以及添加交联剂到几丁聚醣溶液混合降解生成几丁聚醣奈米粒子。

前述的方法，其中几丁聚醣溶液降解方法选择其一，包括离子凝胶、乳剂聚合乳化扩散。

本发明的一种几丁聚醣-脱氧核糖核酸复合体，其特征在于，包括：至少一个含氨基的几丁聚醣奈米粒子；至少一个交联剂；以及至少一个脱氧核糖核酸，与几丁聚醣奈米粒子交联N/P比不大于1∶5。

前述的几丁聚醣-脱氧核糖核酸复合体，其中脱氧核糖核酸与几丁聚醣奈米粒子交联N/P比不小于1∶0.25。

前述的几丁聚醣脱氧核糖核酸复合体，其中几丁聚醣脱氧核糖核酸复合体交联剂为硫胺焦磷酸(TPP)。

前述的几丁聚醣-脱氧核糖核酸复合体，其中几丁聚醣-脱氧核糖核酸复合体N/P比介于1∶2至1∶5。

前述的几丁聚醣-脱氧核糖核酸复合体，其中几丁聚醣-脱氧核糖核酸复合体的脱氧核糖核酸是脱氧核糖核酸质体。

前述的几丁聚醣脱氧核糖核酸复合体，其中几丁聚醣-脱氧核糖核酸复合体的脱氧核糖核酸是脱氧核糖核酸疫苗。

前述的几丁聚醣-脱氧核糖核酸复合体，其中几丁聚醣-脱氧核糖核酸复合体的脱氧核糖核酸是日本脑炎脱氧核糖核酸疫苗。