[发明专利]一种检测牛型结核分枝杆菌抗体的免疫层析试纸及其制备方法

权利要求书

1.一种检测牛型结核分枝杆菌抗体的免疫层析试纸，包括样品垫、紧密连接于所述样品垫一端的含有金黄色葡萄球菌蛋白A标记胶体金探针的金标垫、与所述金标垫的另一端紧密连接的硝酸纤维膜和紧密连接于所述硝酸纤维膜另一端的吸水垫；所述硝酸纤维膜包被有相互分离的检测线和质控线，所述检测线含有结核分枝杆菌抗原，所述质控线含有能与所述金黄色葡萄球菌蛋白A特异结合的抗体。

2.根据权利要求1所述的检测牛型结核分枝杆菌抗体的免疫层析试纸，其特征在于：所述检测包被抗原来自本发明的发明人对牛型结核分枝杆菌MPB70、MPB83、ESXA和ESXB四种蛋白进行的分别克隆表达，优选为MPB70、MPB83、ESXA和ESXB四种蛋白的混合配比抗原；所述金黄色葡萄球菌蛋白A特异性抗体为以金黄色葡萄球菌蛋白A为抗原免疫动物得到的抗体，所述免疫动物的选择是多种多样的，如羊、兔、猴、鸡或鼠等常用的免疫动物；所述检测线含有MPB70的浓度为1-3mg/mL、MPB83的浓度为1-3mg/mL、ESXA和ESXB的浓度为1-3mg/mL，其中ESXA和ESXB的抗原比例为1∶1-1∶1.8，所述质控线含有的能与金黄色葡萄球菌蛋白A特异结合的抗体的浓度可为3-5mg/mL。

3.根据权利要求2所述的检测牛型结核分枝杆菌抗体的免疫层析试纸，其特征在于：所述结核分枝杆菌抗原为MPB70、MPB83、ESXA和ESXB四种蛋白的混合配比抗原

4.根据权利要求1所述的检测牛型结核分枝杆菌抗体的免疫层析试纸，其特征在于：所述检测牛型结核分枝杆菌抗体的免疫层析试纸的背面紧密连接一背板。

5.一种制备权利要求1所述的检测牛型结核分枝杆菌抗体的免疫层析试纸的方法，包括以下步骤：

A.制备牛型结核分枝杆菌抗原，将结核分枝杆菌抗原溶液喷到纤维素膜上形成检测线，将能与金黄色葡萄球菌蛋白A特异结合的抗体溶液喷到所述纤维膜的另一区域形成质控线，然后将吸水垫粘贴在所述纤维素膜的远离所述测试带的一端；

B.制备金黄色葡萄球菌蛋白A标记的免疫胶体金探针溶液，将玻璃纤维膜或聚脂膜浸入该免疫胶体金探针溶液，得到金标垫，将其粘贴在步骤1)得到的纤维素膜的靠近所述检测线的一端；

C.将在步骤2)中得到的金标垫上远离所述检测线的一端粘贴样品垫，得到检测牛型结核分枝杆菌抗体的免疫层析试纸。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：所述步骤1)所述检测包被抗原来自本发明的发明人对牛型结核分枝杆菌MPB70、MPB83、ESXA和ESXB四种蛋白进行的分别克隆表达，优选为MPB70、MPB83、ESXA和ESXB四种蛋白的混合配比抗原；所述金黄色葡萄球菌蛋白A特异性抗体为以金黄色葡萄球菌蛋白A为抗原免疫动物得到的抗体，所述免疫动物的选择是多种多样的，如羊、兔、猴、鸡或鼠等常用的免疫动物；所述检测线含有MPB70的浓度为1-3mg/mL、MPB83的浓度为1-3mg/mL、ESXA和ESXB的浓度为1-3mg/mL，其中ESXA和ESXB的抗原比例为1∶1-1∶1.8，所述质控线含有的能与金黄色葡萄球菌蛋白A特异结合的抗体的浓度可为3-5mg/mL。