[发明专利]白细胞分类计数试剂、试剂盒以及白细胞分类计数的方法

说明书

技术领域

本发明涉及血液细胞分类计数试剂及血液细胞分类计数方法，更具体地 讲，本发明涉及用于对白细胞进行分类计数的血液分析试剂、包含所述试剂的 试剂盒及采用所述试剂或试剂盒进行白细胞分类计数的方法。

背景技术

人体血液的细胞大致分为三类：红细胞、白细胞和血小板，其中白细胞又 可以分为单核细胞、淋巴细胞和粒细胞(包括嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和嗜 碱性粒细胞)五个亚类。血细胞在骨髓中生成，从未成熟细胞分化、成熟后再 进入末梢血液发挥各自功能。正常健康人的末梢血中的白细胞的各个亚类的比 例是恒定的，当人体出现一些疾病时，就会表现出某一类白细胞数量的增大或 减小。此外，在正常健康人的静脉血中并不会出现一些未发育成熟的DNA含量 比正常白细胞高的未成熟白细胞(immature leukocyte)，而在患有白血病、癌 症骨髓转移和重症感染症等病人的静脉血中则往往会出现未成熟白细胞，常见 的是幼稚粒细胞；而在被病毒如肝炎病毒、巨细胞病毒等感染的病人的静脉血 中往往会出现一些异常细胞，常见的为异常淋巴细胞等。因此在临床检验领 域，用患者血液对白细胞进行分类计数，并检测出未成熟白细胞及异常细胞的 有无及计数，以此对某些病症进行筛查是极其常见并且是非常重要的。

现在，医院多采用自动血细胞分析仪对白细胞进行分类计数。从检测手段 来看，白细胞的分类计数方法主要分为阻抗法和激光流式法两类，而其他的一 些检测手段如射频、直流电等技术则应用较少。白细胞的两分群、三分群一般 都采用阻抗法，而对于五分类和其他异常形态白细胞的识别则普遍采用激光流 式法，通过测定多角度散射光、荧光染料标记的荧光量、抗原抗体标记的量以 及其各种组合来对白细胞进行分类。

在医院对病人血液样本进行分析处理时，从病人体内采集新鲜抗凝血样 后，有时会放置一段时间后进行分析，有时会对放置较长时间的病人血样进行 复检。随着放置时间的延长，新鲜血样逐渐老化，而同一血样的新鲜血和老化 血之间细胞形态会出现一些变化，往往会造成老化血的白细胞分类计数可信度 降低。

中国专利CN95115317.x公开了一种通过两种试剂对白细胞进行五分类的方 法。其中第一试剂含有带阴离子的有机化合物如酸性色素，将白细胞分成淋巴 细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞以及嗜碱性粒细胞加中性粒细胞四类，第二试 剂将血细胞分成嗜碱性粒细胞和其他细胞类群。该方法通过综合这两种结果对 白细胞分成五类。检测时采用激光散射法。采用本方法对嗜碱性粒细胞进行分 类时需要较长的稳定时间，至少要120秒后才能测定，这样会限制仪器的检测速 度。此外本方法无法很好的对于未成熟白细胞进行识别和计数。

美国专利3883247是一篇白细胞五分类方法专利，通过异染色质荧光染料如 吖啶橙对白细胞核酸进行染色，通过不同的白细胞亚类红色和绿色荧光量的差 异来对白细胞进行分类。该方法采用的吖啶橙对人体毒性较大，容易污染环 境。该方法的另一个不足是其所需要的染色时间比较长，需要几十秒到几分 钟，这就会限制仪器的检测速度。

美国专利4882284是一篇白细胞五分类方法专利，采用非溶血的方法通过噁 嗪类荧光染料对血细胞中的各种细胞进行染色，然后通过不同细胞的前向散射 光、侧向散射光和红色荧光强度来对白细胞进行分类。采用该方法时，由于同 时需要测定红细胞、白细胞和血小板，则一些异常红细胞如大红细胞等会影响 白细胞准确计数。

申请号88101677，审定号为CN1018586B的中国专利是一篇白细胞五分类方法 和试剂系统专利。该专利先采用酸性溶血剂对红细胞进行充分溶解并保持白细 胞完整，再通过碱性盐溶液抑制过度溶解并对白细胞进行分类。其检测系统采 用光散射或者射频/直流电法。用此方法不能很好区分出未成熟白细胞与正常白 细胞。此外该专利进行分类的最适反应条件为常温，而实际测定时外界环境温 度往往会发生变化，测量结果也会随之产生波动，导致分类计数准确性降低， 根据此方法，为了保持温度恒定在室温从而消除温度对反应的影响，就需要在 仪器中同时添加制冷和加热装置，这样会大大增加仪器成本。

中国专利CN97123137.0是一篇早幼白细胞分类计数的方法专利，该专利采 用含有非离子表面活性剂和氨基酸的溶血剂对血样进行处理，使早幼白细胞保 持生存状态而使其他白细胞损伤，通过荧光染料对上述白细胞进行染色从而精 确对早幼白细胞和白细胞进行分类计数。但该方法只能将白细胞分成淋巴、单 核和粒细胞三类，无法对白细胞进行五分类。