[发明专利]一种快速测定多糖硫酸酯中硫含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种测定硫含量的方法，具体涉及一种快速测定多糖硫酸酯 中硫含量的方法。

背景技术

多糖硫酸酯(polysaccharide sulfate)是多糖大分子链中单糖分子上的某些 羟基被硫酸根所取代而形成的一种化学结构复杂、生物活性多样、构效关系 鲜明的多糖衍生物，它包括从动、植物中提取的各种硫酸多糖、肝素、天然 中性多糖的硫酸衍生物及人工合成、半合成的各种硫酸多糖如硫酸葡聚糖、 硫酸戊聚糖、硫酸木聚糖、硫酸香菇多糖、岩藻依聚糖、卡拉胶硫酸软骨素 等。多糖硫酸酯具有广泛的生物学性质，包括抗病毒、抗肿瘤、抗艾滋病、 增强免疫系统功能和抗凝活性等，因而受到极大关注。取代度的高低直接影 响多糖的活性，羟基的硫酸酯化，不仅增加了多糖的溶解性，更重要的是改变了 多糖的构象，因此，多糖硫酸酯中硫酸根含量的测定是多糖硫酸酯构效关系研 究的一个重要方面。

现有的测定样品中硫含量的方法有：离子色谱法(IC)、硫酸钡浊度法、元 素分析法、X射线荧光(XRF)法、电感耦合等离子体-原子发射光谱法(ICP- AES)、原子吸收光谱法(AAS)和电化学分析法等。中国专利CN 1811400A于 2006年8月2日公开了一种“示波极谱法测定馏分油中元素硫含量”的方法，在样 品中加入三苯基磷使之与元素硫生成三苯基磷硫化物，根据所测溶液产生的 极谱波峰电流值与其元素硫含量的相关性进行测定，此方法只适用于所针对 的样品，应用范围窄。文献“离子色谱法测定高山红景天多糖硫酸酯中硫酸根 含量的研究”(《分子科学学报》，2000，9，16(3))于2000年在《分子科学学 报》16卷第3期报道了利用离子色谱法测定高山红景天多糖硫酸酯中硫酸根含 量的方法，样品需灰化处理，该方法存在线性范围较窄(1～20mg/L)、重复性 差等缺点。文献“盐酸水解-硫酸钡重量法测定硫酸酯化多糖硫酸基含量方法考 察”(《食品科学》2002，(23)5，107～111)于2002年在《食品科学》23卷第5 期报道了盐酸水解-硫酸钡重量法测定硫酸酯化多糖硫酸基含量方法，该方法 操作烦琐、杂质干扰严重，由于水解时间、加入明胶-氯化钡溶液等保温时间 的不同而使测定结果精确度和灵敏度都不理想，人们期望有一种能够快速、 准确地测定多糖硫酸酯中硫含量的方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种快速、准确地测定多糖硫酸酯中 硫含量的方法。

为解决上述技术问题，本发明一种快速测定多糖硫酸酯中硫含量的方法， 包括如下步骤：

(1)绘制标准曲线并建立回归方程：

取一定质量的Na₂SO₄定容于容量瓶中制备硫酸根(SO₄^2-)浓度为100 mg/ml的母液，然后，依次稀释成0.05、0.1、0.5、1、5、10mg/ml的硫酸根 梯度标准溶液。取此梯度标准溶液分别注入高效液相色谱(HPLC)检测，每次 进样量为20ul，每个样品测定三次，以峰面积平均值为纵坐标(Y)、硫酸根梯 度标准溶液浓度为横坐标(X)绘制标准曲线并建立回归方程；

(2)样品的处理：

称取待测多糖硫酸酯干物质样品，加入浓度为1～4mol/L的盐酸，其中 所述干物质样品与盐酸的比例为，重量∶体积＝1mg∶1～2ml，在100℃下氮气 保护水解4～6小时，然后在40～60℃、0.06～0.08MPa下减压浓缩蒸干得到 干物质A；

(3)样品硫含量的测定：

将干物质A用超纯水溶解定容，使其硫酸根浓度在0.05～10mg/ml范围 内，取所定容的样品溶液注入高效液相色谱检测，每次进样量为20ul，每个 样品测定三次，将峰面积平均值代入步骤(1)中所建立的回归方程算出定容 后样品溶液的硫酸根浓度(mg/ml)，根据所定容样品溶液中硫酸根的质量和所 用多糖硫酸酯干物质样品的质量算出该干物质样品的硫酸根含量，最后由硫 在硫酸根中的质量百分比(33.33％)算出该干物质样品的硫含量(质量百分比)。

高效液相色谱参数：

色谱柱：Sephadex G-10柱；

洗脱剂：超纯水；

洗脱速率：1ml/min；

柱温：30℃；

检测器：示差折光检测器，检测器温度35℃；

进样量：20ul；