[发明专利]两个与陆地棉细胞质雄性不育恢复基因连锁新标记的开发及应用

权利要求书

1.两个与陆地棉细胞质雄性不育恢复基因连锁新标记MGHES28和STSHY27的开发。其步骤包括：

a).构建(P30A×Y18R)×P30B回交群体BC₁F₁代共369个单株，田间调查育性分离，可育株为180株，不育株为189株，卡方测验(X²＝0.11，P＞0.95)结果表明，可育与不育分离比例为1∶1，完全符合一对显性基因控制的模型。

b).SDS-CTAB法提取回交群体BC₁F₁代共369个单株的棉花叶片基因组DNA。构建可育和不育DNA混合池，每个混合池由5个单株构成。所有构建的可育和不育DNA混合池用于SSR和STS标记分析。

c).MGHES28和STSHY27标记分析回交群体可育和不育DNA混合池，进一步分析回交群体中不育单株出现的重组体。MGHES28和STSHY27标记扩增可育DNA混合池的特异DNA片段回收测序。

d).数据分析。

2.两个新标记MGHES28和STSHY27应用于棉花恢复系的分子鉴定。

a)提取不同棉花恢复系(R1，R2，R3，R4和R5)、保持系(B1，B2，B3，B4和B5)和不育系(A1，A2，A3，A4和A5)叶片基因组DNA。

b)以不同棉花恢复系(R1，R2，R3，R4和R5)、保持系(B1，B2，B3，B4和B5)和不育系(A1，A2，A3，A4和A5)叶片基因组DNA为模板，MGHES28和STSHY27标记进行PCR扩增，产物分别在5.0％聚丙烯胺和1.0％的琼脂糖凝胶电泳检测。

c)MGHES28和STSHY27标记在恢复系中扩增的特异DNA片段可明显的区分恢复系、保持系和不育系。

3.根据权利要求1的分子标记MGHES28引物，其特征在于：具有SEQ ID No.1和SEQ ID No.2的核苷酸序列。

4.根据权利要求1的分子标记STSHY28引物，其特征在于：具有SEQ ID No.3和SEQ ID No.4的核苷酸序列。

5.根据权利要求1或2或3的分子标记MGHES28，其特征在于：具有SEQ ID No.5的核苷酸序列。

6.根据权利要求1或2或4的分子标记STSHY27，其特征在于：具有SEQ ID No.6的核苷酸序列。

7.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述分子标记具有SEQ ID No.5的核苷酸序列。

8.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述分子标记具有SEQ ID No.6的核苷酸序列。

9.用于SSR分析来获得与棉花细胞质雄性不育恢复基因的分子标记MGHES28引物对，其特征在于具有SEQ ID No.1或SEQ ID No.2的核苷酸序列。用于STS分析来获得与棉花细胞质雄性不育恢复基因的分子标记STSHY27引物对，其特征在于具有SEQ ID No.3或SEQ ID No.4的核苷酸序列。

10.根据权利要求9所述用来SSR分析获得棉花细胞质雄性不育恢复基因分子标记MGHES28引物对扩增的特异DNA片段。其特征在于：所获得的分子标记引物对扩增的特异DNA片段具有SEQ ID No.5的核苷酸序列。

11.根据权利要求9所述用来STS分析获得棉花细胞质雄性不育恢复基因分子标记STSHY27引物对扩增的特异DNA片段。其特征在于：所获得的分子标记引物对扩增的特异DNA片段具有SEQ ID No.6的核苷酸序列。