[发明专利]一种降解辛硫磷农药的微生物制剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生物利用技术领域，尤其涉及一种可高效降解有机磷农药的 菌株和利用该菌株制备而成的菌剂及该菌剂的制备方法。

背景技术

我国现在每年农药总产量已达50万吨，迄今为止，我国农药的积累用量已 达400多万吨。杀虫剂占所有农药的70％以上，其中高毒的有机磷杀虫剂又占所 有杀虫剂的70％以上，即高毒的有机磷杀虫剂占整个农药市场的50％以上。在年 产量万吨以上的6个杀虫剂品种中，有5个是有机磷杀虫剂。从目前农药使用 情况看，高毒农药使用量大，使用次数频繁是造成某些食品，特别是蔬菜、水 果农药残留超标的主要原因。对于毒性低的农药，若用量大或使用不当也同样 可造成对某些食品的污染。

有机磷农药(OPs)在杀虫剂中占据重要的地位，是世界上生产和使用最多的 农药品种，我国的有机磷农药在杀虫剂中占70％，近几年经调整有所下降，但仍 然是控制农作物害虫和病虫媒昆虫的重要手段。然而，由于有机磷农药的毒性， 随着广泛使用，也带来严重的副作用，日益成为重要的化学环境污染物。有证 据表明，OPs具有诱变性和致畸胎性，哺乳动物的神经和免疫系统疾病大多与 OPs相关，这些疾病包括疯牛病、海湾战争综合症、帕金森综合症等。如何消除 有机磷农药残留对环境和人类的危害，已成为事关人类健康和国民经济发展的 问题。

微生物降解被认为是消除有机磷农药残留的一种有效措施，一直是国内外 学者研究的热门方向。利用生物或生物产品来降解污染物的生物修复方法具有 无毒、无残留、无二次污染等优点，是消除和解毒高浓度农药残留的一种安全、 有效、廉价的方法。但现有的降解有机磷的微生物存在生长缓慢，缺少竞争优 势，降解性能不稳定等问题。细菌由于其具生化上多种适应能力以及容易诱发 突变，从而在降解农药的微生物中占有主要的地位，尤其是假单胞菌属 (Pseudomonas sp.)的菌株降解能力较强。

发明内容

本发明目的是，针对目前微生物降解技术中所存在的缺少生长快、培养简 单、能高效降解有机磷农药残留微生物菌种的现状，提供一种生长速度快、培 养方法简单、能高效、稳定降解辛硫磷等有机磷类农药的菌株，并利用该菌株 生产用于治理有机磷类农药引起的土壤、农作物及其产品污染的菌剂及该菌剂 的制备方法。

本发明目的通过以下技术方案得以实现。

本发明所提供的微生物是一株命名为YJL-1的假单胞菌属(Pseudomonas sp.)菌株，该菌株通过以下培养、分离、筛选而得到：

1)我们取2007年10月在杭州农药厂污水处理池中采集的活性污泥2g， 加入100ml富集培养基中，该培养基的配方为：NaCl 0.5-1.5g/L，NH₄NO₃0.5-1.5g/L，K₂HPO₄ 1.0-2.0g，KH₂PO₄ 0.3-0.8g/L，MgSO₄·7H₂O 0.1-0.3g/L， 酵母提取物0.05-0.2g/L，调pH7.0-7.2后，按50-100mg/L添加辛硫磷，于28-37 ℃，120-180rpm摇床培养；

2)上述培养液每1-2周转接移种一次，以5-10％的接种量接入新鲜培养基 中，如此驯化3-6个月；将最终的培养菌液用平板稀释法进行细菌分离，从中 获得生长快、菌落规则的单菌落30多个；

3)将单菌接入LB试管中培养后，加入含50-100mg/L辛硫磷的无机盐培养 基中，3d后检测辛硫磷含量，经过降解性能验证，筛选得到降解率最高的菌株 (编号为X-1)，经生理生化鉴定，确定该菌株属假单胞菌属(Pseudomonas sp.)， 命名为YJL-1；保存于LB斜面或甘油冻存管中，使用时在含辛硫磷的培养基上 进行活化；该菌株的主要特征为：革兰氏阴性、无芽孢的杆状菌，菌落为淡黄 色，边缘规则，表面光滑，无褶皱，好氧，化能异样，氧化酶阴性、接触酶阳 性；最适生长温度为28-30℃，最适生长pH为7.0-7.2，在无机盐培养基中以 (100mg/L)辛硫磷为唯一碳源生长，3-5天降解率达90-95％；

该菌已于2009年7月22日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微 生物中心，保藏编号为CGMCC No.3211。