[发明专利]一种降解辛硫磷农药的微生物制剂及其制备方法

权利要求书

1.假单胞菌属Pseudomonas sp.YJL-1菌株，其菌株保藏号为CGMCC NO.3211。

2.一种降解辛硫磷农药的微生物菌剂，其特征在于该菌剂是以LB为斜面 或液体培养基；以NaCl 0.5-1.5g/L，NH₄NO₃ 0.5-1.5g/L，K₂HPO₄ 1.0-2.0g，KH₂PO₄0.3-0.8g/L，MgSO₄·7H₂O 0.1-0.3g/L，酵母提取物0.05-0.2g/L，调pH7.0-7.2 为无机盐培养基；以葡萄糖5-15g/L，酵母膏1-2g/L，(NH₄)₂SO₄1.0-2.0g/L， NaCl0.5-1g/L为发酵培养基；以保藏编号为CGMCC No.3211的假单胞菌属 Pseudomonas sp.YJL-1菌株为菌种，经活化、扩增及菌剂发酵制备而获得。

3.一种降解辛硫磷农药的微生物菌剂的制备方法，其特征在于按以下步骤 进行：

1)各种培养基的配制：包括

①LB培养基：2.5-7.5g/LNaCl，2.5-7.5g/L酵母膏，5-15g/L蛋白胨；

②无机盐培养基：NaCl 0.5-1.5g/L，NH₄NO₃0.5-1.5g/L，K₂HPO₄1.0-2.0g/L， KH₂PO₄0.3-0.8g/L，MgSO₄·7H₂O 0.1-0.3g/L，酵母提取物0.05-0.2g/L，调 pH7.0-7.2；

③发酵培养基：葡萄糖5-15g/L，酵母膏1-2g/L，(NH₄)₂SO₄1.0-2.0g/L， NaCl0.5-1g/L；

2)菌种的制备：将保藏编号为CGMCC No.3211的YJL-1菌株接种于LB斜 面上，30-35℃培养18-24h，斜面保存于0-4℃冰箱中冷藏、备用；或将YJL-1 菌株接种于LB试管中，120-180rpm振荡，30-35℃培养18-24h，将菌液加入 50-70％的甘油中，-40℃至-80℃低温保存、备用；

3)菌种的活化：从LB斜面或甘油冻存管中划线至固体LB平板中，30-35 ℃活化培养18-24h；将活化后的单菌落接种于LB液体培养基中，加入100mg/L 辛硫磷，30-35℃，120-180rpm摇床培养至对数生长期；将上述培养液离心，用 pH7.0-7.2磷酸缓冲液清洗后，以5-10％接种量加入含50-100mg/L辛硫磷的无 机盐培养基中，30℃，150rpm摇床培养，3d后检测辛硫磷浓度，当降解率达到 90％以上时，作为菌种使用；

4)摇瓶菌种扩增：按照步骤(3)的方法将菌体培养至对数生长期，按5-10％ 的接种量接入100mlLB培养基中，在pH7.0-7.2，摇床转速120-150rpm下培养 18-24h，菌液直接用于接种或0-4℃冰箱中冷藏、备用；

5)菌剂发酵：将步骤(1)发酵培养基加入发酵罐中，罐内温度121℃保持 30分钟后，保压至0.02-0.18MPa之间，进行蒸汽高温灭菌后冷却至30-35℃； 在火焰保护下迅速通过接种阀门向种子罐内接入步骤(4)摇瓶菌种，接种量为 5-10％，搅拌机转速为110-220转/分，温度30-35℃，通气量2-4m³/h，罐压 0.02-0.18MPa，pH自然，培养18-24小时至菌体数达到10⁸个/ml以上，发酵 菌液灌装于无菌塑料瓶中即成菌剂产品，直接应用或于室温下保存。