[发明专利]一种电泳用聚丙烯酰胺预制凝胶的缓冲系统

权利要求书

1.一种电泳用聚丙烯酰胺预制凝胶的缓冲系统，包括：阳极电泳槽缓冲液、阴极电泳槽缓冲液、分离凝胶和浓缩凝胶，其特征在于：所述浓缩凝胶和分离凝胶含有：100～300mmol/L三羟基甲基氨基甲烷和0.1～0.4％(w/v)十二烷基硫酸钠，并以柠檬酸滴定pH至6.5～6.9；

所述阳极电泳槽缓冲液和阴极电泳槽缓冲液中含有80～120mmol/L三羟基甲基氨基甲烷-N-(2-羟乙基)哌嗪-N′-2-乙烷磺酸和0.1～0.4％(w/v)十二烷基硫酸钠，pH值调至7.5～8。

2.如权利要求1所述电泳用聚丙烯酰胺预制凝胶的缓冲系统，其特征在于：所述浓缩凝胶和分离凝胶含有：200mmol/L三羟基甲基氨基甲烷及0.2％(w/v)十二烷基硫酸钠，以柠檬酸(Citrate)滴定pH至6.8；

所述阳极电泳槽缓冲液和阴极电泳槽缓冲液中含有100mmol/L三羟基甲基氨基甲烷-N-(2-羟乙基)哌嗪-N′-2-乙烷磺酸和0.2％(w/v)十二烷基硫酸钠，pH值调至7.8。

3.一种制备电泳用聚丙烯酰胺预制凝胶的缓冲系统的方法，其特征在于

(1)、将30％ACr-0.8％Bis凝胶贮液与三羟基甲基氨基甲烷-柠檬酸缓冲液，pH 6.8，10％(w/v)十二烷基硫酸钠及10％过硫酸铵混匀，将N，N，N’，N’-四甲基乙二胺入混合液，混匀；

分离胶含有8％(v/v)凝胶贮液、200mmol/L三羟基甲基氨基甲烷、0.2％(w/v)十二烷基硫酸钠，0.05％(w/v)过硫酸铵及0.01％(v/v)TEMED；

浓缩胶分别4％(v/v)凝胶贮液、200mmol/L三羟基甲基氨基甲烷、0.2％(w/v)十二烷基硫酸钠，0.05％(w/v)过硫酸铵及0.01％(v/v)TEMED；

(2)、将配置好的分离胶溶液缓慢加入制胶板之间，其上覆盖厚度为0.4-0.8cm的正丁醇层至凝胶完全聚合。

(3)、分离胶聚合后，倒除正丁醇，用蒸馏水冲洗分离胶胶面两次，用滤纸吸去残液，用滴管将浓缩胶溶液加在分离胶面上，充满制胶板，插入样品梳；(4)、配阳极电泳槽缓冲液和阴极电泳槽缓冲液，向槽中加注电极缓冲液，阳极和阴极电泳槽缓冲液中含有100mmol/L三羟基甲基氨基甲烷-HEPES和0.2％(w/v)十二烷基硫酸钠，pH 7.8。