[发明专利]固定化顺式环氧琥珀酸水解酶基因工程菌细胞及D(-)-酒石酸或其盐的制备方法有效
| 申请号： | 200910152483.6 | 申请日： | 2009-09-14 |
| 公开（公告）号： | CN101649314A | 公开（公告）日： | 2010-02-17 |
| 发明（设计）人： | 张建国;谢志鹏;潘海峰;鲍文娜 | 申请（专利权）人： | 杭州宝晶生物化工有限公司 |
| 主分类号： | C12N11/10 | 分类号： | C12N11/10;C12P7/46;C12R1/19 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 | 代理人： | 林怀禹 |
| 地址： | 311106浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 固定 顺式 琥珀酸 水解 基因工程 细胞 酒石酸 制备 方法 | ||
1.一种固定化顺式环氧琥珀酸水解酶基因工程菌细胞的制备方法，其特征是：在κ-卡拉胶溶液中加入顺式环氧琥珀酸水解酶基因工程菌细胞充分混合均匀，将上述混合溶液冷却直至充分凝固后再在氯化钾溶液中固定，然后将凝胶取出切成小块，依次用蒸馏水和生理盐水洗涤；所述顺式环氧琥珀酸水解酶基因工程菌细胞为pET-ESH-E.coli，该基因工程菌细胞与所述κ-卡拉胶溶液在42-45℃的条件下均匀混合，冷却温度为4-10℃，所述氯化钾溶液的浓度为0.1-0.5mol/L，所述固定的温度为4-10℃，固定的时间为4-16h；所述κ-卡拉胶的浓度为20-60g/L；相对于每升κ-卡拉胶溶液，所述顺式环氧琥珀酸水解酶基因工程菌细胞的添加量为20-120g。
2.根据权利要求1所述的固定化顺式环氧琥珀酸水解酶基因工程菌细胞的制备方法，其特征是：所述顺式环氧琥珀酸水解酶基因工程菌细胞与κ-卡拉胶溶液在42℃的条件下均匀混合，冷却温度为4℃，所述氯化钾溶液的浓度为0.3mol/L，所述固定的温度为4℃，固定的时间为10h。
3.根据权利要求1或2所述的固定化顺式环氧琥珀酸水解酶基因工程菌细胞的制备方法，其特征是：所述κ-卡拉胶的浓度为30-50g/L；相对于每升κ-卡拉胶溶液，所述顺式环氧琥珀酸水解酶基因工程菌细胞的添加量为40-100g。
4.根据权利要求3所述的固定化顺式环氧琥珀酸水解酶基因工程菌细胞的制备方法，其特征是：所述κ-卡拉胶的浓度为40-50g/L；相对于每升κ-卡拉胶溶液，所述顺式环氧琥珀酸水解酶基因工程菌细胞的添加量为60-80g。
5.一种使用权利要求1的固定化基因工程菌细胞制备D(-)-酒石酸或其盐的方法，其特征是：在顺式环氧琥珀酸或其盐溶液中加入固定化顺式环氧琥珀酸水解酶基因工程菌细胞进行酶促反应，生成D(-)-酒石酸或其盐。
6.根据权利要求5所述的制备D(-)-酒石酸或其盐的方法，其特征是：所述固定化顺式环氧琥珀酸水解酶基因工程菌细胞为pET-ESH-E.coli，所述顺式环氧琥珀酸或其盐溶液的浓度为0.5-1.0mol/L，所述顺式环氧琥珀酸或其盐溶液的pH值为6.0-8.0，所述酶促反应的反应温度为30-40℃。
7.根据权利要求6所述的制备D(-)-酒石酸或其盐的方法，其特征是：所述顺式环氧琥珀酸或其盐溶液的浓度为0.5mol/L，所述顺式环氧琥珀酸或其盐溶液的pH值为7.0，所述酶促反应的反应温度为30℃。
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