[发明专利]一种新型畜用肽苗及其制备方法

权利要求书

1.一种抗口蹄疫病毒的肽疫苗，其特征在于肽抗原具有如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。

2.权利要求1中所述疫苗，其特征在于，所述疫苗还包含相应的 佐剂。

3.权利要求1所述的肽疫苗在制备预防和/或治疗口蹄疫的药物中 的用途。

4.一种根据权利要求1中所述的肽疫苗的制备方法，主要包括以 下步骤：

(1)抗原肽的化学合成；

(2)抗原肽的裂解、沉淀；

(3)高压液相色谱分离纯化多肽抗原；

(4)疫苗配置。

5.根据权利要求4所述的疫苗制备方法，抗原肽的化学合成其特 征在于，是以氨基树脂和9芴甲氧羰基(Fmoc)氨基酸为原料，逐步 接上氨基酸，每步接肽反应后用乙酰咪唑封闭未反应的活性氨基端，主 要包括如下步骤：

(a)FMOC基团脱除：用含15％-35％六氢吡啶的二甲基甲酰氨 (DMF)溶液在20-26℃条件反应20-40分钟脱除氨基上保护的FMOC 基团，氮气吹干，二甲基甲酰氨(DMF)洗涤树脂；

(b)接肽反应：加入1-羟基苯丙三氮唑(HOBT)、苯并三氮唑 -N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)、二异丙基乙胺(DIEA)与 FMOC保护的氨基酸在20-28℃条件反应0.5-2.5小时，氮气吹干，二甲 基甲酰氨(DMF)洗涤树脂；

(c)封闭反应：使用1.5％-3.5％的乙酰咪唑在20-26℃条件反应15-30 分钟。

6.根据权利要求4所述疫苗的制备方法，其中所述多肽抗原裂解 所用试剂为：三氟乙酸(TFA)/苯酚(Phenol)/H₂O＝90/8/2，裂解时 间为1-3小时。

7.根据权利要求4所述疫苗的制备方法，特征在于，疫苗配制的 方法包括如下：

(a)用注射用水将肽抗原稀释到30-200μg/ml；

(b)将油佐剂高压灭菌后备用。

(c)在20-28℃条件下将抗原水相与油佐剂按照5∶5的比例进行乳化， 分装后即得到肽疫苗。