[发明专利]甘草中glycyrrhisoflavone的筛选方法﹑提取方法﹑含量测定方法及用途

说明书

技术领域：

本发明涉及中药材有效成分的分析、提取技术，还涉及化工技术，特别是甘 草中glycyrrhisoflavone的确认方法、提取方法、含量测定方法及用途。

背景技术：

抑制α-葡萄糖苷酶可以显著降低进食碳水化合物后的血糖浓度，因此可以 成为调节II型糖尿病人及高危人群餐后血糖浓度的重要方法，参见Rammohan Subramanian，M.Zaini Asmawi and Amirin Sadikun.2008.In vitro α-glucosidase and α-amylase enzyme inhibitory effects of Andrographis paniculata extract and andrographolide.Acta Biochemica polonica 55(2)：391-398。同时，α-葡萄糖苷酶抑制剂易与其他类型糖尿病治疗药物并用 等种种因素，都使α-葡萄糖苷酶抑制剂成为糖尿病治疗中的重要药物。目前临 床使用的α-葡萄糖苷酶抑制剂主要包括阿卡波糖(Acarbose)，伏格列波糖 (Voglibose)和米格列醇(Miglitol)三种。然而，阿卡波糖和伏格列波糖 具有强烈的肠道副作用，以及由于其分解产物在肠道内吸收而引起的肝损伤副作 用。而米格列醇虽然降低了肠道副作用，而且尚无肝损伤副作用报道，但其临床 用量的1/2以未变化体形式在小肠上部被吸收，对体内的存在的α-葡萄糖苷酶 的影响仍然需要关注。基于以上，作为糖尿病治疗药物的新型α-葡萄糖苷酶抑 制剂的研制与开发仍须进一步研发和完善。

甘草为豆科(Leguminosae)甘草属(Glycyrrhiza)植物的根和根状茎，在 《神农本草经》中作为上品收载，其主要功效是和中缓急、润肺、解毒、调和诸 药等，是临床应用最为广泛的传统中药。甘草含有多种活性成分为皂苷类、黄酮 类和异黄酮类化合物。其黄酮类成分有治疗糖尿病的生物活性，参见Kaku Nakagawa，Hideyuki Kishida；Naoki Arai，Tozo Nishiyama，and Tatsumasa Mae.2004.Licorice flavonoids suppress abdominal fat accumulation and increase in blood glucose level in obese diabetic KK-Ay Mice Biol.Pharm.Bull 27(11)， 1775-1778。

Glycyrrhisoflavone一词没有规范的中文译文，属于黄酮类物质， Isoflavone是异黄酮的意思。

发明内容：

本发明的目的之一是提供一种甘草中glycyrrhisoflavone的筛选方法；

本发明的目的之二是提供两种甘草中glycyrrhisoflavone的提取方法；

本发明的目的之三是提供一种glycyrrhisoflavone的用途；

本发明的目的之四是提供一种甘草中glycyrrhisoflavone含量的定量分析方 法。

本发明的目的按照下述技术方案实现：

甘草中glycyrrhisoflavone的筛选方法，包括以下工艺过程：

1)甘草乙醇提取物(LF)用水悬浊后使用乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯层LE。

2)利用silica对LE进行柱层析，依次使用氯仿，氯仿-甲醇和氯仿-甲醇-水 系统进行梯度洗脱，对流出液依照硅胶薄层层析结果进行合并，得到14个分 离部位LE1-9，LEa-e；在1mg/mL浓度下进行α-葡萄糖苷酶抑制活性测定， LE8对蔗糖酶和麦芽糖酶的抑制活性最高。

3)利用反相ODS硅胶柱对LE8进行层析，使用甲醇-水和甲醇系统进行洗脱， 得到2个分离部位LE81，LE82，分离部位LE81在1mg/mL浓度下对蔗糖酶和 麦芽糖酶的抑制活性最高。

4)LE81上高效液相色谱，使用甲醇-水-含三氟乙酸进行洗脱，得到9个分离 部位LE811-819；分离部位LE818在1mg/mL浓度对蔗糖酶和麦芽糖酶的抑 制活性最高。