[发明专利]甘草中glycyrrhisoflavone的筛选方法﹑提取方法﹑含量测定方法及用途

权利要求书

1.甘草中甘草异黄酮（glycyrrhisoflavone）的筛选方法，包括以下工艺过程：

1）甘草乙醇提取物（LF）用水悬浊后使用乙酸乙酯及正丁醇萃取得到乙酸乙酯层(LE),乙酸乙酯提取部(LE)利用硅（silica）柱层析，依次使用氯仿5.5L，氯仿-甲醇97:3、1.5L, 氯仿-甲醇95:5、4L, 氯仿-甲醇93:7、5L, 氯仿-甲醇9:1、5L和氯仿-甲醇-水60:20:3、4L, 氯仿-甲醇-水60:29:6、4L, 氯仿-甲醇-水6:4:1、4.5L系统进行梯度洗脱，每个分离部位500mL共得到67个分离部位，依照硅胶薄层层析结果进行合并，得到14个分离部位LE1-14；在1mg/mL浓度下进行a-葡萄糖苷酶抑制活性测定，LE8活性最强；

2）甘草黄酮分离部位LE8利用反相ODS硅胶柱层析，使用甲醇-水70：30、500mL和甲醇500mL系统进行洗脱，分别得到分离部位LE81和LE82；两分离部位分别在1mg/mL浓度评价了其对a-葡萄糖苷酶的抑制活性，分离部位LE81抑制活性较强；甘草黄酮分离部位LE81利用JASCO PU-1580高效液相色谱仪， Shodex RI-71示差检测器， Waters X-Bridge ODS制备柱，流速为5mL/min,流动相甲醇-0.06%三氟乙酸70：30，v/v，使用甲醇-水，含0.06%三氟乙酸，进行洗脱，得到9个分离部位LE811-819；各分离部位分别在1mg/mL浓度评价了其对a-葡萄糖苷酶的抑制活性；分离部位LE818抑制活性最强； 

3）通过核磁共振法确定了LE818的结构，为化合物glycyrrhisoflavone，其分子式为：C₂₀H₁₈O₆，化学结构式为：

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2.甘草中甘草异黄酮（glycyrrhisoflavone）的提取方法，其工艺过程为：将甘草乙醇提取物用水混悬后加入乙酸乙酯提取，乙酸乙酯层上硅（silica）柱层析，用氯仿-甲醇95：5洗脱，根据硅胶薄层层析结果将含有甘草异黄酮（glycyrrhisoflavone）的部分进行合并，旋干后得固体；利用JASCO PU-1580高效液相色谱仪， Shodex RI-71示差检测器，Waters X-Bridge ODS 柱制备柱，流速为5mL/min,流动相甲醇-0.06%三氟乙酸70：30,v/v，使用甲醇-水，含0.06%三氟乙酸，进行洗脱制备，根据高效液相色谱仪检查结果，得到含有甘草异黄酮（glycyrrhisoflavone）的部分，再利用HP-20大孔树脂柱用30%甲醇洗脱至洗脱液呈中性，除去三氟乙酸，旋干后得到甘草异黄酮（glycyrrhisoflavone）。

3.甘草中甘草异黄酮（glycyrrhisoflavone）的提取方法，将甘草乙醇提取物上HP-20大孔树脂柱，依次用甲醇-水70：30、甲醇-水90：10、甲醇各1000ml洗脱，根据高效液相色谱仪检查结果90%甲醇部分含有甘草异黄酮（glycyrrhisoflavone），旋干得固体，将HP-20大孔树脂柱所得样品上silica柱层析进一步分离，用氯仿-甲醇95：5洗脱，根据硅胶薄层层析结果将含有甘草异黄酮（glycyrrhisoflavone）的部分进行合并，旋干后得固体，利用JASCO PU-1580高效液相色谱仪， Shodex RI-71示差检测器，Waters X-Bridge ODS 柱制备柱，流速为5mL/min,流动相甲醇-0.06%三氟乙酸70：30、v/v，使用甲醇-水，含0.06%三氟乙酸，进行洗脱制备，根据高效液相色谱仪检查结果，得到含有甘草异黄酮（glycyrrhisoflavone）的部分，再利用HP-20大孔树脂柱用30%甲醇洗脱至洗脱液呈中性除去三氟乙酸，旋干后得到甘草异黄酮（glycyrrhisoflavone）。