[发明专利]一种从裂殖壶菌提取并精制富含二十二碳六烯酸的方法无效
申请号: | 200910111657.4 | 申请日: | 2009-05-06 |
公开(公告)号: | CN101638361A | 公开(公告)日: | 2010-02-03 |
发明(设计)人: | 江斌;吴松刚;黄建忠 | 申请(专利权)人: | 厦门金达威集团股份有限公司;内蒙古金达威药业有限公司 |
主分类号: | C07C57/03 | 分类号: | C07C57/03;C07C51/42;C12P7/64;C12R1/645 |
代理公司: | 福州元创专利商标代理有限公司 | 代理人: | 蔡学俊;吴钦缘 |
地址: | 361022福建省厦*** | 国省代码: | 福建;35 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 裂殖壶菌 提取 精制 富含 十二 碳六烯酸 方法 | ||
技术领域
本发明属于生物技术领域,涉及一种从裂殖壶菌(Schizochytrium ATCC 20888)中提取并精制富含二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid,简称DHA)的方法。
技术背景
二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid,简称DHA)是目前发现的碳链最长、不饱和度最高的长链高度不饱和脂肪酸(Long-chain polyunsaturated fatty acids,Lc-PUFAs)。DHA是机体生物膜的重要结构组分,在婴幼儿神经发育、视网膜形成、智力发展等方面具有重要作用,而且也是前列腺素、环前列腺素和白三烯素等具有强烈生理活性的自身调节物质的前体,对预防心血管疾病、抗血脂、降血压、抑制肿瘤形成等具有显著作用(Hadley KB,et al,2009,World Rev Nutr Diet.99:97-104;Hawthorne KM,et al,2009,J Am Diet Assoc.109:708-712.)。由于具有上述多种重要生理功能,DHA已成为价值高、市场广泛的脂肪酸产品。深海鱼油是提取DHA的主要原料,全球每年用于提炼DHA的鱼油约为1.1×106吨(Gunstone F,2001,Oleochemical manufacture and application.),由于过度开发捕捞深海鱼类,鱼油资源难以满足人们对DHA日益增长的需求。随着世界需求市场的供不应求,寻找DHA新的油源成为各国科学家亟待解决的问题。近年来的研究发现,深海鱼类并不具备合成DHA的整套酶系,鱼油中的DHA主要来自于食物链中的海洋DHA产生菌,裂殖壶菌(Schizochytrium)、破囊壶菌(Thraustochytrium)、寇氏裂殖壶菌(Crypthecodinium cohnii)等海洋微生物才是自然界中DHA的真正第一生产者,通过发酵工程技术生产出的微生物细胞油已被确认是鱼油的理想代替品(Chi Z,et al,2009,Appl Microbiol Biotechnol.81:1141-1148;Ganuza E,et al,2008,Aquaculture.277:109-116;Kang DH,et al,2007,Korean Journal of Chemical Engineering.24:651-654.)
由于寇氏裂殖壶菌培养周期较长,容易染菌;破囊壶菌脂肪酸组成复杂,较难分离纯化,因此,人们把研究的目光投向裂殖壶菌。裂殖壶菌具有良好的产DHA特性:裂殖壶菌不仅像细菌一样二分裂繁殖,生长速度快,而且其油脂可占自身干重的70%以上,DHA最高可占总油脂的90%,其中90%的油脂是中性脂,存在于细胞质中,提取简单,极具有产业开发前途。
发明内容
本发明的目的是提供了一种采用有机溶剂高效萃取,从裂殖壶菌提取并精制富含二十二碳六烯酸的方法。
本发明的目的是通过下列技术措施实现的。
一种从裂殖壶菌Schizochytrium ATCC 20888中提取并精制富含DHA脂肪酸的方法,其特征是:
1、先将裂殖壶菌发酵液絮凝处理再进行固液分离;
2、通过碱破壁后再采用机械破碎法将裂殖壶菌细胞破碎;
3、然后对破碎的裂殖壶菌细胞采用有机溶剂萃取,获得富含DHA的粗油;
4、DHA粗油经过脱胶、碱炼、脱色和脱臭后得到富含的精制油脂(DHA精油)。
所述的裂殖壶菌发酵液是通过下列方法获得的:先将裂殖壶菌Schizochytrium ATCC20888活化三代后进行种子培养,获得活力较高的菌种(即处于对数生长期的菌种),在含有碳源、氮源、无机盐的培养基中发酵,收获菌体。其中碳源优选葡萄糖,氮源优选蛋白胨与酵母膏,无机盐优选海水晶(天津市汉沽区同兴海水晶厂)。
所述的发酵液絮凝处理过程是首先向裂殖壶菌发酵液中按照每升裂殖壶菌发酵液添加10-20g的絮凝剂,使发酵液絮凝并沉淀,将上层的水除去,留下裂殖壶菌细胞沉淀物。絮凝处理所用的絮凝剂为硫酸铝钾、硫酸铝、聚合硫酸铁、聚合氯化铝、聚硅硫酸铝或聚硅硫酸铁。
所述的固液分离是指在裂殖壶菌细胞沉淀物中按照每升发酵液沉淀物添加3~100mL的质量浓度为95%的食用酒精;静置后将上层清液除去,同时将沉降于下层的裂殖壶菌细胞进行离心,进一步除去上层清液。
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