[发明专利]一种从裂殖壶菌提取并精制富含二十二碳六烯酸的方法

权利要求书

1、一种从裂殖壶菌提取并精制富含二十二碳六烯酸的方法，其特征在于先将裂殖壶菌发酵液絮凝处理再进行固液分离，通过碱破壁后再将细胞机械破碎，然后对破碎的菌体采用有机溶剂萃取，获得DHA粗油；DHA粗油经过脱胶、碱炼、脱色、脱臭后得到DHA精油。

2、如权利要求1所述的从裂殖壶菌提取并精制富含二十二碳六烯酸的方法，其特征在于所述的裂殖壶菌发酵液是通过下列方法获得的：先将裂殖壶菌Schizochytrium ATCC 20888活化三代后进行种子培养，获得活力较高的菌种，在含有碳源、氮源、无机盐的培养基中发酵，收获菌体，其中碳源优选葡萄糖，氮源优选蛋白胨与酵母膏，无机盐优选海水晶。

3、如权利要求1所述的从裂殖壶菌提取并精制富含二十二碳六烯酸的方法，其特征在于絮凝处理采用的絮凝剂为硫酸铝钾、硫酸铝、聚合硫酸铁、聚合氯化铝、聚硅硫酸铝或聚硅硫酸铁。

4、如权利要求3所述的从裂殖壶菌提取并精制富含二十二碳六烯酸的方法，其特征在于絮凝剂的用量为每升裂殖壶菌发酵液添加10-20g的絮凝剂。

5、如权利要求1所述的从裂殖壶菌提取并精制富含二十二碳六烯酸的方法，其特征在于固液分离是指在裂殖壶菌细胞沉淀物中按照每升发酵液沉淀物添加3～100mL的质量浓度为95％的食用酒精；静置后将上层清液除去，同时将沉降于下层的裂殖壶菌细胞进行离心，进一步除去上层清液。

6、如权利要求1所述的从裂殖壶菌提取并精制富含二十二碳六烯酸的方法，其特征在于机械破碎法对细胞进行破碎其过程是：首先用NaOH配制pH为12-14的水溶液，将固液分离步骤中离心所得的裂殖壶菌细胞倒入该水溶液中，碱性环境下进行破壁；然后将裂殖壶菌细胞送入胶体磨中，磨成细胞碎片，再送入均质破碎机中高压破碎，获得破碎细胞浆液，再次离心除去水份得到破碎细胞的物料。

7、如权利要求1所述的从裂殖壶菌提取并精制富含二十二碳六烯酸的方法，其特征在于所述的采用有机溶剂萃取，获得富含DHA的粗油是指按照水∶物料∶有机溶剂(质量比)＝1∶1∶3～7的比例在萃取罐中进行萃取，搅拌20～40min左右，停止搅拌，静置分层，最下层为水，中层为料渣，上层为有机溶剂和DHA粗油，取上层溶液通过减压蒸发器将有机溶剂蒸出，反复多次抽提，获得DHA粗油。

8、如权利要求1、7所述的从裂殖壶菌提取并精制富含二十二碳六烯酸的方法，其特征在于萃取所用的有机溶剂为丙酮、正己烷、石油醚、醋酸乙酯、环己烷。

9、如权利要求1所述的从裂殖壶菌提取并精制富含二十二碳六烯酸的方法，其特征在于所述的脱胶是采用磷酸脱胶，即将DHA粗油预热到85～95℃，按照每升DHA粗油加入1～2g质量浓度为75～85％的磷酸搅拌均匀，添加20～30mL温度为90～95℃的水，同时，以60rpm速度搅拌，当磷呈沉淀析出时，搅拌速度降低至30rpm，继续搅拌10分钟，完毕后静置10分钟，然后离心分离，获得脱胶后的脱胶DHA粗油。

10、如权利要求1所述的从裂殖壶菌提取并精制富含二十二碳六烯酸的方法，其特征在于所述的碱炼是采用NaOH中和方法，即将脱胶后的脱胶DHA粗油打入碱炼锅，快速搅拌并加热至20～40℃，按每升脱胶后的脱胶DHA粗油匀速分散地喷洒100mL浓度为5moL/L的NaOH，加NaOH时间控制在20min左右；加NaOH完毕继续快速搅拌30min后，改慢速搅拌并开始升温至75～80℃，匀速喷洒入占脱胶后的DHA粗油重5％与油同温或略高于油温的软水，加水时间控制在5min左右；加水完毕停止升温及搅拌，静置沉降3～4h，放出沉淀，将油打入水洗锅，在快速搅拌下加热到95℃左右，匀速分散喷洒入微沸的软水，加水量约为油重15％，进行水洗，加水时间控制在20min左右；加水完毕在快速搅拌的条件下泵入水洗离心机进行油水分离，获得碱炼后的碱炼DHA粗油。