[发明专利]一种检测黄酒中氨基甲酸乙酯的方法

说明书

技术领域

本发明属于食品分析和食品安全技术领域，尤其涉及一种检测黄酒中氨基甲酸乙酯含量的方法。

技术背景

氨基甲酸乙酯(简称EC，又称脲烷)广泛存在于各种发酵食品中，特别是饮料酒中，是一种潜在的致癌物质。世界卫生组织国际癌症研究机构已将氨基甲酸乙酯(EC)归为2A类致癌物，与丙烯酰胺同等危险。世界卫生组织和联合国粮农组织(WHO/FAO)食品添加剂专业委员会(JECFA)于2005年对氨基甲酸乙酯进行了系统性的评估，强调氨基甲酸乙酯的摄入主要来源于饮料酒，建议必须采取有效措施降低饮料酒中的氨基甲酸乙酯含量。

由于饮料酒中氨基甲酸乙酯浓度过低以及饮料酒中成分复杂，对检测的干扰太大导致对饮料酒中氨基甲酸乙酯的检测十分困难。传统的固相萃取-气相色谱/质谱联用法(SPE-GC/MS)已被权威机构美国官方分析化学师协会(AOAC)、国际葡萄与葡萄酒局(OIV)和欧盟写入标准检测方法，但该法对样品的预处理极为复杂，耗时，而且检测成本较高，不适宜用于实验室的常规分析。

黄酒中存在的氨基甲酸乙酯已经面临着国际贸易技术壁垒的威胁，并将成为限制我国黄酒产业进一步健康持续发展的一大障碍，同时这也会对广大消费者的生命安全造成严重威胁。因此，建立一种检测黄酒中氨基甲酸乙酯的方法显得十分有必要。从目前的研究情况来看，大部分黄酒中氨基甲酸乙酯的检测方法仍然采用传统的固相萃取-气相色谱/质谱联用法(SPE-GC/MS)，检测成本高，耗时，不适合常规分析。

发明内容

本发明提供了一种利用高效液相色谱仪荧光检测器检测黄酒中氨基甲酸乙酯的方法，具有操作简单、重复性好、精密度高和检测成本低等特点。

一种检测黄酒中氨基甲酸乙酯的方法，步骤如下：

(1)利用减压蒸馏，对黄酒进行预处理，使得黄酒体积减少为初始体积的1/5-1/10；

所述的减压蒸馏的温度为30-40℃(优选35℃)；

(2)将经过预处理的黄酒与盐酸及9-羟基吨溶液混合进行衍生化反应，得到衍生化后的黄酒；

所述的衍生化反应时间为30min，在室温条件下反应；

黄酒、盐酸、9-羟基吨溶液的体积比为：

黄酒∶盐酸∶9-羟基吨溶液＝(7～10)∶1∶2，(优选10∶1∶2)；

所述的盐酸的浓度为1～2.0mol/L(优选1.5mol/L)；

所述的9-羟基吨溶液为9-羟基吨的正丙醇溶液，9-羟基吨溶液中9-羟基吨的浓度为0.01-0.03mol/L(优选0.02mol/L)；

氨基甲酸乙酯与9-羟基吨之间的衍生化反应如下：

氨基甲酸乙酯本身没有荧光特性，但衍生化反应后得到的产物吨基尿烷在233nm波长光的激发下，能发射出600nm的荧光，因此通过高效液相色谱(HPLC)分离后它能够被荧光检测器(FLD)所定量。

黄酒∶盐酸∶9-羟基吨溶液合适的用量比以及优选的盐酸的浓度可以使衍生化反应进行的更彻底，使最终的检测结果更加精确。

(3)利用高效液相色谱仪对衍生化后的黄酒进行组分分离，采用外标法计算氨基甲酸乙酯含量；

所述的高效液相色谱仪采用C18反相柱(柱子长度250×柱子直径4.6mm，填充料直径4μm参数的含义说一下)，检测温度35℃，进样量20μL，氨基甲酸乙酯出峰时间为35-38min；

采用甲醇和水作为流动相进行梯度洗脱，梯度洗脱时流动相随时间变化见下表：

表中甲醇和水的比例为体积百分比。

本发明采用特定的分离条件，实现了氨基甲酸乙酯的精确分离以及含量检测，利用步骤(1)～步骤(3)的方法进行测定氨基甲酸乙酯含量时，利用外标法所得标准曲线，峰面积与氨基甲酸乙酯浓度间的相关系数R²＝0.9990；对同一样品进行多次测定得到方法的精密度RSD＜5％；利用标准物质加入法测定方法的回收率在98％-101％；由此可见本发明方法具有很高的精度。

本发明采用减压蒸馏对黄酒样品进行预处理，以达到富集黄酒中氨基甲酸乙酯的目的，处理后的样品可以用于氨基甲酸乙酯的定量测定。在指定的HPLC条件下测定黄酒中氨基甲酸乙酯含量。

本发明方法操作简单，检测成本低，与传统的固相萃取-GC/MS分析方法相比需要的仪器设备简单，样品前处理不复杂，所需要的检测条件简便，花费的检测时间较短。

附图说明

图1为空白对照的高效液相色谱图。

图2为氨基甲酸乙酯标准品的高效液相色谱图。

图3为实施例1的高效液相色谱图。