[发明专利]一种弱病毒防治矮牵牛病毒病的方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物病毒的防治技术领域，尤其涉及一种弱病毒防治矮牵牛病毒病的方法。

背景技术

矮牵牛(Petunia hybrida)原产南美，属茄科碧冬茄属植物，是一种广泛用于盆栽、花坛的 草本植物。因其花期长，花色品种多而深受人们的喜爱，在美化环境上有很高的观赏价值。 但因病毒的严重危害，症状感病植株出现叶斑驳症，形成花叶，颜色有深有浅，常伴有叶卷 曲，生长势减弱，花畸形，变小等，使其观赏价值大大降低。据调查表明，种子繁殖的发病 率为20～30％，无性繁殖的发病率可高达90％左右。自然侵染矮牵牛的病毒以黄瓜花叶病毒 (CMV)为主。

植物病毒是侵染蔬菜花卉药材和大田作物的细胞内致病的微生物，因为其按照寄主的细 胞系统进行基本的代谢和复制侵染过程，因些其不能像细菌和真菌等病原微生物那样通过药 物治疗达到根除效果。迄今，对植物病毒进行控制仍然没有“特效药”，控制的主要方法是预 防其侵染。实践证明：预先接种弱病毒株能够干扰其后侵梁的强病毒株的危害，降低其影响， 达到抗病增产和改善作物品质的作用。以黄瓜花叶病毒(CMV)为例，该病毒能够侵染1000 多种植物，可经75种蚜虫传播，也是目前世界范围内寄主植物最多、分布最广、危害严重的 植物病毒之一。预防病毒传播媒介昆虫和获得无病毒繁殖材料并不是在任何情况下均能够有 效实施。用弱病毒株进行预防接种的方法是行之有效的方法之一。但是，预防接种的方法大 都采用浸根、喷枪和摩擦接种法，在接种弱病毒前必须进行种子消毒和苗床防治蚜虫、白粉 虱，严防幼苗在接种弱病毒前被强病毒感染，具有费时、使用方法繁琐、效率低等缺点，故 不利于产业化，无法满足现代农业的需求。

发明内容

本发明要解决上述现有技术的缺陷，提供一种弱病毒防治矮牵牛病毒病的方法。

本发明目的通过以下技术方案来实现：这种弱病毒防治矮牵牛病毒病的方法，按如下步 骤进行：

1)、培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为：

(1)基本培养基：基本培养基采用MS培养基，其中，蔗糖或白糖20～30g/L，琼脂7～ 9g/L，pH5.6～6.0；

(2)无菌播种培养基：1/2MS；

(3)诱导培养基：1/3MS+BA 1.0～3.0mg/L和NAA 0.1～0.5mg/L；

(4)增殖培养基：1/2MS+BA 0.1～1.0mg/L和NAA 0.05～0.5mg/L；

(5)壮苗培养基：MS+BA0.1～0.5mg/L和NAA0.01～0.1mg/L；

(6)生根培养基：1/2MS+NAA 0.01～0.1mg/L；

2)、矮牵牛茎尖脱毒培养：

(1)外植体的选取与灭菌：取矮牵牛的种子，经灭菌处理后接种在无菌播种培养基上， 在培养条件下培养30～45天后，从种子培养成高约5～7cm的实生苗，无需灭菌直接作为茎 尖脱毒培养用的外植体；或取温室盆栽的性状纯正、生长健壮的矮牵牛植株上的幼芽，经灭 菌处理后作为茎尖脱毒培养用的外植体；

(2)茎尖脱毒培养：将无菌播种培养的实生苗的顶芽或灭菌处理后的温室盆栽的幼芽在 无菌条件下，在40倍的双筒解剖镜下，摘出0.15～0.3mm大小的带1～2个叶原基的茎尖， 接种在诱导培养基上，在培养条件下培养30～45天后，从茎尖诱导形成幼芽或丛生芽；

(3)增殖培养：将诱导形成的幼芽或丛生芽切成单芽接到增殖培养基上，在培养条件下 培养30～45天增殖出丛生芽；根据对幼苗数量的需求，每隔30～45天按同样方法进行幼苗 再增殖培养；

(4)壮苗培养：将增殖出的丛生芽接种到壮苗培养基上，在培养条件下培养20～30天 后，幼苗株高生长达2～5厘米；

(5)生根培养：将培养的壮苗切成单株接种在生根培养基中进行生根培养，在培养条件 下培养20～30天后，幼苗长高成约5～7cm、苗基部长出5～10根细根；

(6)移栽：在隔离温室中，将生根组培苗移栽于基质中，培育1～2个月至成苗。

(7)定植：在隔离温室中，将移栽苗定植在温室盆钵中，培育3～5个月至植株开花。

3)、病毒ELISA检测：