[发明专利]动物虫媒病多重RT-PCR鉴别检测试剂及制备方法和应用有效
| 申请号： | 200910094767.4 | 申请日： | 2009-07-27 |
| 公开（公告）号： | CN101724712A | 公开（公告）日： | 2010-06-09 |
| 发明（设计）人： | 花群义;阮周曦;曾少灵;张彩虹;陶虹;孙洁;曹琛福;吕建强;卢体康;林庆燕 | 申请（专利权）人： | 花群义 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93 |
| 代理公司： | 云南派特律师事务所 53110 | 代理人： | 张怡 |
| 地址： | 518010 广东省深圳市罗*** | 国省代码： | 广东;44 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 动物 虫媒病 多重 rt pcr 鉴别 检测 试剂 制备 方法 应用 | ||
1.一种动物虫媒病多重RT-PCR鉴别检测试剂，其特征在于包含四对特异性引物，蓝舌病病毒、鹿流行性出血病病毒、水泡性口炎病毒、赤羽病病毒各自的扩增目标片段长度为351bp、537bp、301bp和250bp，引物序列为：
BTV引物：BTV-P1：5’-CTTCCTTGAAACTGAGGAAACCTT-3’
BTV-P2：5’-ATTTGCACCATCGCATTCTG-3’；
EHDV引物：EHDV-P1：5’-CCAGAATGTTACTACATCAATCGTATCCT-3’
EHDV-P2：5’-GGCGCCAATACGCTAAAGG-3’；
VSV引物：VSV-P1：5’-GGCTTCCCATCTACATCCTAGG-3’
VSV-P2：5’-TGCCCAAATGTTGCAAGTG-3’；
AKV引物：AKV-P1：5’-CAACGATGTTCCACAACGG-3’
AKV-P2：5’-GGCAGTGTCTGACACTGGATT-3’。
2.如权利要求1所述的动物虫媒病多重RT-PCR鉴别检测试剂的制备方法，其特征在于由以下步骤组成：
一、选择蓝舌病病毒VP7基因序列的保守片段为靶目标，其基因片段的扩增目标核苷酸序列为：CTTCCTTGAAACTGAGGAAACCTTCCAACCAGGGAGGTGGTTCATGCGCGCCGCTCAAGCAGTAACTGCAGTAGTGTGCGGTCCGGATATGATTCAAGTGTCACTTAATGGCGGAGCGAGAGGAGATGTACAACAGATATTTCAGGGTCGTAATGATCCCATGATGATATATTTAGTGTGGAGGAGAATCGAAAACTTTGCGATGGCGCAAGGTAATTCACAGCAAACTCAAGCGGGTGTGACTGTCAGTGTTGGTGGAGTTGACATGAGGGCGGGACGCATTATAGCATGGGATGGACAGGCCGCGCTGCATGTGCATAATCCGACACAACAGAATGCGATGGTGCAAAT；
二、选择鹿流行性出血病病毒VP7基因序列的保守片段为靶目标，其基因片段的扩增目标核苷酸序列为：
CCAGAATGTTACTACATCAATCGTATCCTCGACTTTAGCTCAGGTTTCAATGAATGCTGGGGCACGGGGTGATATCCAGGCGCTATTTCAAAATCAAAATGATCCTGTAATGATTTACTTTGTGTGGAGACGAATTGGGACTTTTTCGAATGCAGCGGGTAATGCACAAGATACACCTCAGGGCGTGACTCTGAACGTGGGGGGTGTAAACATGAGGGCTGGTGTGATAATAGCTTATGATGGGCAAGCGCCGGTTAATGTGAATAACCCAGGTCTAGGACAAGGTATGATCGAGATTGAAGTGATCTATTATTTGAGTTTAGACAAAACCATGACCCAGTA TCCATCATTACAAGCACATATATTCAATGTTTACTCATATAAGAATCCTTTGTGGCATGGACTACGAGCTGCGATTCTTAACAGAACAACGCTACCAAACAATATACCGCCCATTTATCCGCCTCATGATCGCGAGAACGTTTTGTTGATAATATTGCTGTCAGCTTTAGCAGATGCCTTTAGCGTATTGGCGCC；
三、选择水泡性口炎病毒N基因序列的保守片段为靶目标，其基因片段的扩增目标核苷酸序列为：GGCTTCCCATCTACATCCTAGGTCTTTACAGAGTGGGCAGATCTAAAGTTACGGATTACAGAAAGAAACTACTGGACGGGCTTGAAAATCAGTGCAAAGTGGCGTCAACCAGATTTGAGAGTCTAGTCGAGGATGGTCTCGACTTCTTTAACATATGGGAGAATGATCCAAATTTCACCAAGATAGTTGCTGCAGTGGATATGTTCTTCCACATGCTCAAAAAGCATGAACGTGCTCCAATCAGATACGGAACCATAGTCTCAAGATTCAAGGACTGTGCAGCACTTGCAACATTTGGGCA；
四、选择赤羽病病毒N基因的保守片段为靶目标，其基因片段的扩增目标核苷酸序列为：CAACGATGTTCCACAACGGAATGCAGCTACATTTAACCCGGATGCAGGGTATGTGGCATTTATCAGTAAGTATGGGCAGCAGCTCAACTTTACTGTTGCTAGAGTCTTCTTCCTCAACCAGAAGAAGGCCAAGATGGTCTTACATAAGACGCCACAACCAAGTGTCGATCTTACTTTTGCAGGGGTCAAATTTACAGTGGTTAATAACCATTTTCCCCAGTACACTGCAAATCCAGTGTCAGACACTGCC；
五、应用primer Express软件和primer prere5.0软件，设计引物；
六、引物的合成采用β-乙腈亚磷酸胺化学合成法，使用全自动DNA合成仪进行OligoDNA的合成；
七、将设计合成的多对引物进行最佳配对筛选实验后，确定并得到权利要求1所述的四对引物。
3.权利要求1所述的动物虫媒病多重RT-PCR鉴别检测试剂在制备试剂盒中的应用。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于花群义，未经花群义许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/200910094767.4/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
