[发明专利]鹿流行性出血热病毒单克隆抗体及制备方法和用途

权利要求书

1、一种鹿流行性出血热病毒单克隆抗体，其特征在于是一种免疫球蛋白-IgG，由重链和轻链构成，是由经过鹿流行性出血热病毒免疫BALB/c小鼠的脾淋巴细胞分化形成的B细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)通过细胞融合后获得的杂交瘤细胞分泌产生的、只针对鹿流行性出血病病毒特异性抗原决定簇的抗体。

2、如权利要求1所述的鹿流行性出血热病毒单克隆抗体的制备方法，其特征在于由以下步骤组成：

一、鹿流行性出血热病毒的纯化；EHDV接种BHK-21细胞，出现细胞病变后收获病毒，反复冻融3次，二次离心将细胞碎片和病毒液分开，采用20％、60％(w/v)不连续蔗糖密度梯度超速离心3h，以纯化EHDV病毒；

二、用提纯的鹿流行性出血热病毒抗原免疫BALB/c鼠；每隔2周免疫1次，共免疫3次，纯化的EHDV病毒注射剂量分别100μg、100μg和200μg；

三、取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞在50％聚乙二醇(MW4000)融合剂下融合，HAT筛选培养基筛选杂交瘤细胞，用间接ELISA方法检测分泌抗EHDV的阳性孔；

四、用有限稀释法进行细胞克隆，经间接ELISA筛选阳性克隆，获得能稳定传代并分泌抗EHDV的特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞；

五、挑选12周龄BALB/C小鼠，按5～10×10⁵个杂交瘤细胞注射入BALB/c鼠腹腔制备单克隆抗体腹水；

六、用间接ELISA所述的方法鉴定制备单克隆抗体仅与EHDV有特异性免疫反应，而与其它相关病毒没有任何免疫反应。

3、权利要求1所述的鹿流行性出血热病毒单克隆抗体用于鹿流行性出血热病的诊断、检疫、检测和流行病学调查。

4、如权利要求3所述的鹿流行性出血热病毒单克隆抗体在制备可特异性检测鹿流行性出血病抗体的竞争酶联免疫吸附试验(c-ELISA)中的应用。