[发明专利]一种乙型肝炎病毒多位点基因耐药突变检测方法有效
| 申请号： | 200910092331.1 | 申请日： | 2009-09-10 |
| 公开（公告）号： | CN101698891A | 公开（公告）日： | 2010-04-28 |
| 发明（设计）人： | 徐东平;刘妍;钟彦伟;李晓东;戴久增;王琳;李乐 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第三○二医院 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京海虹嘉诚知识产权代理有限公司 11129 | 代理人： | 张涛 |
| 地址： | 100039 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 乙型肝炎 病毒 多位点 基因 耐药 突变 检测 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种检测病毒逆转录酶全基因序列的单管巢式多聚酶链反应基因扩增方法，其特征是：在单管中进行两轮巢式PCR扩增，将外引物浓度稀释至2～8nmol/L，将内引物浓度稀释至50～200nmol/L，使第一轮PCR反应产物全部作为第二轮PCR反应的模板，最终在同一管中完成巢式PCR反应；
所述外引物具有SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列，所述内引物具有SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列；
在PCR反应体系中以1∶10混合加入Pfu DNA聚合酶和普通Taq DNA聚合酶。
2.根据权利要求1所述的方法，所述外引物浓度为3～6nmol/L，内引物浓度为80～120nmol/L。
3.根据权利要求1所述的方法，在PCR反应液体系预先加入橙黄G。
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