[发明专利]禽流感合成肽疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种用于禽流感合成肽疫苗的多肽，其中所述多肽的氨基酸序列如 SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。

2.一种用于禽流感合成肽疫苗的多肽聚合物，其含有权利要求1所述 SEQ ID NO.1所示氨基酸序列，所述多肽聚合物的氨基酸序列如(SEQ ID NO.1)₂-K-εK-CONH₂所示，其中K代表赖氨酸，ε代表在ε氨基有Fmoc保 护的赖氨酸。

3.一种禽流感合成肽疫苗，其中包含权利要求1所述的多肽或权利要求 2所述的多肽聚合物。

4.根据权利要求3所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗包含佐剂。

5.一种根据权利要求1中所述的多肽的制备方法，其中包括以下步骤：

(1)去保护反应：在体积百分比为15％-30％的六氢吡啶的N-甲基吡咯 烷酮溶液中，在20-28℃条件下反应25-40分钟，脱除树脂氨基上的9-芴甲 氧羰基保护基团，氮气吹干，N-甲基吡咯烷酮洗涤；

(2)氨基酸的活化：将合成用的带有9-芴甲氧羰基保护基团的各个氨 基酸与1-羟基苯丙三唑反应合成氨基酸-1-羟基苯丙三唑酯；

(3)缩合反应：使用多肽合成仪将步骤(2)中获得的活化的氨基酸和 步骤(1)中获得的去保护反应后的树脂以及二异丙基碳二亚胺自动加至反 应器中，在20-28℃条件下反应0.5-2.5小时，氮气吹干，N-甲基吡咯烷酮洗 涤树脂；

(4)乙酰化反应：使用重量体积百分比为1.5％-4％的乙酰咪唑的N-甲 基吡咯烷酮溶液与步骤(3)中获得的树脂在20-28℃条件下反应20-40分钟， 氮气吹干，甲醇洗涤树脂；

(5)合成过程由C端至N端，依照氨基酸序列不断的重复步骤(1)- (4)，反应完成后，用N-甲基吡咯烷酮清洗，得到干燥的多肽树脂；

(6)多肽与树脂的分离：向干燥的多肽树脂中加入裂解试剂，所述裂 解试剂的组分体积比为三氟乙酸∶三异丙基硅烷∶乙二硫醇∶苯酚∶水＝85∶ 8∶3∶3∶1；匀速搅拌1-4小时后置于0℃下反应10分钟，恢复至室温，挥 去三氟乙酸，将叔丁基甲醚及二乙醚加入多肽溶液，搅拌洗涤，过滤得多肽 溶液；

(7)超滤纯化多肽及无菌处理：使用膜包在20-28℃条件下超滤多肽， 使用0.22微米在线滤器除菌保存。

6.一种根据权利要求3或4所述的疫苗的制备方法，其中包括以下步骤：

(1)用注射用水将多肽或其多肽聚合物稀释至50μg/ml制得多肽或其 多肽聚合物溶液；

(2)在20-28℃条件下，按照多肽或其多肽聚合物溶液∶佐剂＝1∶1 的体积比，先将佐剂加入乳化罐内，90-150转/分钟慢速搅拌1.5-3分钟；

(3)缓慢加入多肽或其多肽聚合物溶液，搅拌20-30分钟；

(4)高速搅拌15-30分钟后静置5分钟，分装后即得，所述高速搅拌 为8000-10000转/分钟。

7.根据权利要求1中所述的多肽或权利要求2所述的多肽聚合物在制备 预防和/或治疗H9亚型禽流感的药物中的用途。

8.根据权利要求3或4所述的疫苗在制备预防和/或治疗H9亚型禽流感的 药物中的用途。