[发明专利]一种检测DNA之间微小结构差别的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物分子检测方法，特别是关于一种检测DNA之间微小结构差别的方法。

背景技术

DNA作为遗传信息的载体，包含了生命系统的遗传密码，控制着生物体的生长、发育、繁殖、遗传和变异，是细胞中最重要的成分之一。人类生物基因组中含有大量的DNA序列，而DNA序列信息决定了个体的多种特征。许多病变的根源在于DNA序列变异所致。

目前，传统的生物DNA结构检测方法在测定完整的基因序列时，需将其切成重叠的片段并测序，然后将重叠的DNA序列装配成完整的基因，该过程耗时且效率低。而拉曼光谱技术通过对物质的拉曼光谱分析，可以从分子结构水平上了解物质的构成、特性及变化规律。拉曼光谱技术具有结构信息量大，测量速度快，操作方便等优点，对研究DNA结构是非常直接、有效的。通过对DNA分子的拉曼光谱研究，可以反映DNA序列的不同。但由于DNA分子的提取量少，测得的拉曼信号强度弱，而且还受荧光的干扰，因此很难得到高质量的DNA分子拉曼光谱图，拉曼技术应用遇到了困难。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的是提供一种检测DNA之间微小结构差别的方法，该方法能够将序列相近的DNA分子间微小结构差别快速、准确有效地检测出来。

为实现上述目的，本发明采取以下技术方案：一种检测DNA之间微小结构差别的方法，它包括以下步骤：1)制备多个粗糙银片；2)利用LB膜方法制备ODA LB膜，并将ODA单分子置于步骤1)的粗糙银片表面上，得到多个ODA LB膜/粗糙银片；3)将步骤2)中的ODA LB膜/粗糙银片分别放入多个待检测的DNA溶液中浸泡，得到DNA/ODA LB膜；4)在步骤3)中的每一DNA/ODA LB膜/粗糙银片上铺设一层银纳米颗粒，以得到银纳米颗粒/DNA/ODA LB膜/粗糙银片的SERS增强“三明治”体系；5)利用SERS方法检测步骤4)中的每一“三明治”体系上的DNA，如果检测到的SERS图谱中出现的DNA特征峰不同，则待检测DNA的结构存有差别。

在所述步骤1)中，将纯度为99.99％的银片依次放入丙酮、去离子水中，分别在超声仪中超声清洗5～10min，自然晾干，浸泡在2.5mol/l的稀硝酸溶液中10～15min，得到清洁并具有一定粗糙度的银片。

在所述步骤3)中，ODA LB膜/粗糙银片放入多个待检测DNA溶液中浸泡的时间均为4h。

在所述步骤4)中使用的银纳米颗粒的粒径范围为100～140nm。

在所述步骤5)中所用仪器为RENISHAW RM2000型激光显微拉曼光谱仪。

本发明具有以下技术优点：1、本发明方法由于采用了SERS(Surface EnhancedRaman Scattering，表面增强拉曼散射)方法检测DNA分子，有效避开了荧光干扰，因此本发明方法不仅反映的DNA分子结构准确性高，灵敏度高，而且检测速度快。2、由于本发明方法中采用了LB膜技术，因此检测更为有效，增强效果更好。3、本发明方法基于SERS增强原理在DNA/ODA(n-octadecy lamine，十八胺)LB(Langmuir-Blodgett)膜/粗糙银片表面上覆盖了一层银纳米颗粒，得到银纳米颗粒/DNA/ODA LB膜/粗糙银片的“三明治”体系，因此进一步提高了检测灵敏度。本发明方法不仅可以用于检测DNA分子，还可以广泛用于检测其它物质的痕量检测。

附图说明

图1是本发明方法中的“三明治”结构体系

图2是本发明方法中测得的两种不同序列DNA的SERS光谱

具体实施方式

下面结合附图和实施例，对本发明方法进行详细描述。

如图1所示，本发明方法包括以下步骤：

1)制备粗糙银片：将多个纯度为99.99％的银片依次放入丙酮、去离子水中，分别在超声仪中超声清洗5～10min，取出待自然干燥后，浸泡在2.5mol/l的稀硝酸溶液中10～15min，即可得到清洁的粗糙银片1。