[发明专利]促黄体生成激素的磁微粒化学发光免疫分析测定试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于免疫分析医学领域，具体地涉及一种促黄体生成激素的磁微粒化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法。本发明试剂盒结合免疫磁微粒分离技术和化学发光免疫分析技术。

背景技术

促黄体生成激素(luteinizing hormone，LH)是垂体分泌的一种生殖激素，它是在下丘脑产生促性腺释放激素(Gn-RH)的条件下，刺激垂体分泌的一种有两条多肽链通过非共价键结合的糖蛋白激素。其分子量约为30kDa。LH的产生受下丘脑促性腺释放激素的控制，同时又受性腺的正、负反馈调控。在女性，LH促进卵泡发育与成熟、诱发排卵、促进黄体生成、并合成与分泌孕酮，刺激卵泡的颗粒细胞产生并释放雌激素。在男性，LH主要刺激睾丸间质细胞分泌睾酮。

LH检测的临床意义，在女性，月经周期LH的释放高峰与卵巢排卵有着密切关系，因此可以在月经周期中监测血清LH峰值，以确定最佳受孕时间。同时还可以鉴别原发性(卵巢性)或继发性(垂体性)闭经；在男性主要用于鉴别原发性或继发性睾丸功能低下；另外，可鉴别青春期前儿童真性或假性早熟。如果血清促黄体生成激素检测异常，如LH水平的增高可见于：原发性性腺功能减退症，卵巢功能衰竭所致闭经，多囊卵巢综合征等。LH的降低可见于：垂体一下丘脑病变，闭经-乳溢综合征，Kallman综合征，精神性厌食，垂体单纯LH缺乏，青春期延期等。因此，血清LH含量测定对于预测排卵，诊断不孕症，研究和判断下丘脑-垂体-性腺轴功能及有关内分泌疾病的治疗监测等方面有重要意义。

目前用于检测LH的免疫分析方法主要有放射免疫分析、酶联免疫分析、时间分辨荧光免疫分析、化学发光免疫分析等。根据大量的试验结果及临床应用资料，从实用性、稳定性、准确性及发展前景来看，优先顺序依次为：化学发光免疫分析、时间分辨荧光免疫分析、放射免疫分析以及酶免疫分析。放射免疫分析技术因其使用放射性元素作为标记物，对环境有放射性污染，并存在灵敏度不高，操作复杂，试剂保存时间短以及检测成本高等缺点；酶免疫分析法存在灵敏度低，信噪比不高，线性范围窄等方法学制约因素；时间分辨荧光免疫分析对检测环境的要求较高，易受空气尘埃的干扰；化学发光免疫分析(chemiluminescenceimmunoassay，CLEIA)是一种综合了化学发光的高灵敏性和免疫反应的高特异性的检测技术，可使检测灵敏度达到10^-18摩尔水平，而且检测范围可达6个数量级。它是在放射免疫分析和酶免疫分析基础之上发展起来的一种高灵敏度，高特异性，检测线性范围宽，标记物稳定，仪器结构简单，操作简便，自动化程度高，应用广泛，安全无放射性污染的免疫分析技术。目前化学发光免疫分析技术因其具有上述诸多优点得到了广泛的应用。

在实际的免疫检测中，由于待测样品中所含的杂质成分较多，一定程度上影响了检测灵敏度和准确性，所以从复杂的样品基质中快速分离、纯化出目的待测物，是临床检验工作者面临的难题之一。免疫磁微粒技术是利用高分子材料合成一定粒度大小的磁性固相微粒作载体，以物理吸附、化学偶联等方法包被上具有特异性亲合力的各种免疫活性物质(抗原或抗体)，使其为免疫磁微粒，具有分离速度快、效率高、可重复性好，操作简单，不影响被分离细胞或其它生物材料的生物学性状和功能等特点，在外加磁场作用下可定向运动，使得某些特殊成分得以分离、浓集或纯化。

免疫磁微粒技术与化学发光免疫分析技术结合检测待测物，可大大提高检测的灵敏度和准确性，它以微米级磁微粒为载体，利用表面有机物提供的羧基活性基团与蛋白质氨基共价结合，采用抗体进行“搭桥”成免疫磁微粒，可进行抗原、抗体反应。该技术的新颖之处有：(1)采用微小的磁微粒作为固相可增加包被表面积，从而增加了抗体的有效包被量，不仅节省了抗体，而且有助于建立宽范围的免疫检测方法，尤其适合于高浓度临床样本的测定，避免弯钩效应的发生；(2)利用顺磁铁微粒为固相载体，外包被单克隆抗体，增加抗原、抗体的接触面积及底物发光面积，提高反应的灵敏度，并采用旋转磁场使磁微粒起搅拌作用及分离结合抗原-抗体与游离抗体的作用；(3)在液相反应中，使用发光增强剂，将水分子从发光底物的发光位点排开，同时还可缩短发光的达峰时间；(4)使用单克隆抗体，提高了反应的特异性。