[发明专利]促黄体生成激素的磁微粒化学发光免疫分析测定试剂盒

权利要求书

1、一种促黄体生成激素的磁微粒化学发光免疫分析测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：

1)促黄体生成激素系列校准品；2)抗异硫氰酸荧光素单克隆抗体包被的磁微粒溶液；3)异硫氰酸荧光素标记的促黄体生成激素单克隆抗体；4)辣根过氧化物酶标记的促黄体生成激素单克隆抗体；5)化学发光底物液；6)浓缩洗涤液。

2、根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括反应管。

3、根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中反应管的材料为透明聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯或者玻璃。

4、根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述化学发光底物液包含A液和B液，其中，

A液为0.05～0.1M、pH值为8.0～10.0的Tris-HCl缓冲液，且该缓冲液中含有终浓度为3.0～4.0mg/mL的鲁米诺和终浓度为0.1～0.3mg/mL的对碘苯酚；

B液是0.05～0.1M pH值为4.0～5.0的柠檬酸缓冲液，且该缓冲液中含有终浓度为100～200mg/mL的过氧化氢溶液。

5、根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述化学发光底物液：

A液为0.1M、pH值为8.5的Tris-HCl缓冲液，且该缓冲液中含有终浓度为4.0mg/mL的鲁米诺和终浓度为0.3mg/mL的对碘苯酚；

B液是0.1M、pH值为4.6的柠檬酸缓冲液，且该缓冲液中含有终浓度为200mg/mL的过氧化氢溶液。

6、根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述浓缩洗涤液为0.01～0.05M、pH值为7.0～7.5的磷酸盐缓冲液，且该缓冲液中含有体积百分比为0.01～0.05％的吐温20和终浓度为9～10g/L的氯化钠。

7、根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述浓缩洗涤液为0.01M、pH值为7.4的磷酸盐缓冲液，且该缓冲液中含有体积百分比为0.01％的吐温20和终浓度为9g/L的氯化钠。

8、一种权利要求1所述试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下操作步骤：

1)促黄体生成激素系列校准品的制备：用马血清将促黄体生成激素纯品稀释成校准品，其校准品浓度范围为0～200mIU/mL；

2)抗异硫氰酸荧光素单克隆抗体包被的磁微粒溶液的制备：将粒径为2～3μm的磁微粒用戊二醛进行活化，室温搅拌，混匀2小时后，加磁场，静置20～25min，倒出上清，用pH值为7.4的0.01mol/L磷酸盐缓冲液清洗3～5次，并用该缓冲液进行悬浮，浓度为50～100mg/mL；每毫升悬浮液中加入抗FITC单克隆抗体60～100μg，在4℃下搅拌过夜后，加磁场，静置10-15min，倒出上清，用封闭缓冲液于室温封闭3～4小时；最后用pH值为7.4、含体积百分比为0.1～0.3％的吐温-20和质量百分比为0.05～0.1％的叠氮化钠防腐剂的0.01～0.05M磷酸盐洗涤缓冲液清洗3～5次，并用该缓冲液将包被抗体的磁微粒制成5～10mg/mL的工作液；

3)异硫氰酸荧光素标记的促黄体生成激素单克隆抗体制备：将抗促黄体生成激素单克隆抗体置于透析袋，在pH 9.0～9.5、50mmol/L碳酸盐缓冲液中过夜透析后，置入溶有0.01～0.03mg/mL的异硫氰酸荧光素的pH 9.0～9.5、50mmol/L碳酸盐缓冲液中，其中，抗促黄体生成激素单克隆抗体与异硫氰酸荧光素的摩尔用量比为1∶7～1∶12，在4℃下搅拌反应16～20小时后，将缓冲液更换为pH 7.0～7.5、0.01mol/L PBS液，然后每隔4～6小时更换pH 7.0～7.5、0.01mol/L PBS液一次，共更换4～5次，将反应液置于离心管中，3000rpm离心30min，弃去沉淀。上清液为相应标记物，用20％的小牛血清稀释标记物，工作浓度为0.5～1.0μg/mL；

4)辣根过氧化物酶标记的促黄体生成激素单克隆抗体的制备：采用改良过碘酸钠法以辣根过氧化物酶标记促黄体生成激素，采用方阵法选择酶标记物的工作浓度，将制备的酶标记物用稀释液按1∶1000～1∶3000比例稀释成工作浓度；

5)化学发光底物液的配制：

A液为用0.05～0.1M、pH值为8.0～10.0的Tris-HCl缓冲液配制鲁米诺终浓度为3.0～4.0mg/mL、对碘苯酚终浓度为0.1～0.3mg/mL的溶液；

B液为用0.05～0.1M、pH值为4.0～5.0的柠檬酸缓冲液配制过氧化氢终浓度为100～200mg/mL的溶液；

6)浓缩洗涤液的配制：

向0.01～0.05M、pH值为7.0～7.5的磷酸盐缓冲液中加入体积百分比为0.01～0.05％的吐温20和终浓度为9～10g/L的氯化钠；

7)分装上述1)～6)步骤制备的产物和反应管；

8)组装为成品。