[发明专利]一种定量检测血液中PSA和fPSA的磁性免疫层析试纸条及制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医学检验领域，特别是涉及一种定量检测血液中PSA和fPSA的磁性免疫层析试纸条及制备方法。

背景技术

前列腺特异性抗原(PSA)是人体前列腺上皮组织细胞分泌的丝氨酸蛋白酶，是一种分子量为30～33KDa的单链糖蛋白分子，编码基因位于19q13。PSA由前列腺分泌，以低浓度释放到健康男性的血液中，在人体中主要存在于男性前列腺组织、精液和血清中。PSA在人体中主要以游离(fPSA)和结合态(cPSA)存在，两者总合就是总PSA。游离前列腺特异性抗原(fPSA)是指游离状态下的PSA，它没有与α1抗糜蛋白酶等结合。当PSA处在“诊断灰区”(4～10ng/mL)时，fPSA的检测就有重要意义，fPSA/总PSA的比值对诊断前列腺癌的临床价值很大，对良性前列腺增生及前列腺癌的鉴别有显著意义。

目前的血液中总PSA+fPSA的诊断技术主要包括：放射免疫法(RIA)，酶联免疫试验(ELISA)、化学发光(CLIA)、时间分辨荧光、胶体金免疫层析等方法，但这些方法都有各自的特点及不足：放射免疫技术成熟，结果比较准确，线性范围较宽，但操作繁琐，耗时长，且放射性标记物会对操作者产生危害，并且会产生环境污染，目前已经逐渐被其他方法所替代。ELISA和化学发光以及时间分辨荧光法原理类似，只在灵敏度方面有差异，目前大都已经实现自动化、大批量、定量检测，但是存在方法间结果差异大，线性范围较窄等缺点，另外，自动化检测目前由国外大厂商所垄断，仪器设备昂贵，并且不适合单人份和较小批量检测用，大大限制了它们在基层医院、诊所的应用。近年来出现了胶体金免疫层析法来检测总PSA，快速，便捷，单人份操作，但是缺点是只能实现半定量，只能指示一个大概范围，无法实现精确定量，而且因为胶体金灵敏度的限制，无法检测游离PSA，异常标本需要使用其他方法复核检测，无形中增加了被测试者的就医成本，在市场推广方面有较大难度，很难大面积使用。

磁性免疫层析(Mgnetic ImmunoChromatographic Test，MICT)是近年来出现的的一种新一代单人份快速定量检测技术。是以超顺磁性颗粒(superPMPs)代替传统的标记物(胶体金，乳胶颗粒等)来进行免疫层析，通过检测结合在超顺磁性纳米微粒上的生化物质来提供对生物样品的定量检测数据。通过检测测量磁场强度来表达标记在样品区域的量，采用标记的免疫复合物-磁场强度的标准曲线，从而达到定量的目的。该技术与传统技术相比具有下述优势：1)分析灵敏度：比各类目测快速诊断法灵敏10-100倍；2)分析速度：可在15秒内测量到多达6个分析位点的数据；3)线形范围：在4个数量级浓度范围内呈线性；4)所用磁性检测仪器采用固相元件，微型化设计自成一体，独立运行，体积小，操作简便；5)超顺磁性纳米微粒由聚合物包被，不会随时间而衰变；独立的快速诊断色谱卡(MAR Cassette)可直接插入MAR检测仪，为目前许多快速临床诊断试剂的整合提供了广泛的开发空间；而且还避免了操作过程中人员或仪器可能发生的交叉污染，提高了分析和过程的安全性。该技术继承了传统免疫层析法(胶体金，乳胶颗粒等)简便快速，单人份操作的优点，又弥补了传统免疫层析技术灵敏度低，只能定性，不能定量的缺点，代表了当今即时检验(Point of Care Test，POCT)技术发展的方向和潮流，一经问世，发展迅速，目前已经成为替代传统免疫层析技术的首选。

磁性免疫层析是以磁颗粒标记抗体进行免疫反应检测标本中的生物活性物质，通过检测磁性强度来提供对生物样品的定量检测数据，采用标记的免疫复合物-磁场强度的标准曲线，从而计算出待测生物样品的量。目前常用的标记磁颗粒为超顺磁颗粒(superPMPs)，没有外加磁场的情况下不具有任何磁性，只有在外加磁场作用下才会表现出磁性，商品化超顺磁颗粒都经过表面修饰，大大方便了标记过程，标记简便，重复性好。

发明内容

本发明的目的即是将磁性免疫层析技术应用在总PSA+fPSA联合定量检测试纸条中，将总PSA抗体和兔IgG分别共价偶联于超顺磁颗粒上，二者按比例混合之后作为检测流动相，将与之配对的总PSA和FPSA抗体以及羊抗兔IgG包被于硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线，按照常规免疫层析法的原理进行标本的检测，结合简便易行的磁性检测仪进行检测，在实现高灵敏度检测的同时又能大大缩短检测的窗口期，可以避免前述几种检测方法的种种弊端，又综合了前述几种方法的优势：可以单人份检测，也可以批量检测，并且可以即时给出准确的定量结果，测量仪器简单可靠，操作简便，方便实用。