[发明专利]一种定量检测血液中PSA和fPSA的磁性免疫层析试纸条及制备方法

权利要求书

1.一种定量检测血液中PSA和fPSA的磁性免疫层析试纸条，其特征在于：该试纸条是在底板上依次相互交错2mm地粘贴包被膜、结合了总PSA抗体的磁颗粒垫、样品垫、吸水垫、然后在上层覆盖透明塑料密封膜而组装成的试纸条，包被膜上预包被有总PSA+fPSA抗体的检测线T1、T2和质控线C。

2.磁性免疫层析法定量检测血液中PSA和fPSA的磁性免疫层析试纸条制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

A、包被膜的制备：选用单克隆抗体技术制备的高效价总PSA+fPSA配对抗体，使用亲和层析技术纯化；使用0.02mM PBS，pH7.2分别将抗总PSA+fPSA包被抗体以及羊抗兔IgG稀释到0.5-2mg/ml浓度，使用定量喷液装置分别将三者以0.5-0.8cm的间隔喷印于硝酸纤维素膜上，晾干后于封闭液中浸泡10分钟后于25-35℃烘干8小时，加入干燥剂封存备用；

B、磁颗粒垫的制备：选用直径为100-300nm的超顺磁颗粒，使用含有0.1％Tween-20的50mmol醋酸钠缓冲液洗涤磁颗粒，加入EDC使终浓度为20mmol，室温反应1小时，充分洗涤磁颗粒后加入总PSA抗体与磁颗粒的分子比为5∶1，室温反应3小时，加入含有0.5％BSA的0.02MPBS，pH7.2室温封闭30分钟，洗涤磁颗粒，使用含有1％PVP，0.5％Tween-20，5％蔗糖的50mmol硼酸pH8.5的保存缓冲液，复溶磁颗粒，4℃保存备用；使用同样的方法将兔IgG标记到磁颗粒上；将二者按照2∶1的比例充分混匀后使用保存缓冲液以1∶10-1∶15的比例将混合物稀释。将稀释好的磁颗粒使用定量喷液装置以5μl/cm-25μl/cm的量喷涂于磁颗粒垫上；

C、样品垫的处理：将样品垫放入样品垫处理溶液中浸泡处理1小时后取出25-35℃烘干8小时；所述的样品垫处理液是含有1％-5％酪蛋白和0.1％-1％的聚乙烯醇以及0.01-0.2％吐温-20的0.02M磷酸盐缓冲液；

D、试纸条的组装：在透明塑料底板上依次相互交错2mm贴上，包被膜，磁颗粒垫，样品垫，吸水垫，上层透明塑料密封膜得到试纸板，根据要求宽度切割即得到试纸条。