[发明专利]纳米壳聚糖衍生物及制备方法和它的应用

权利要求书

1.纳米壳聚糖衍生物，其特征在于，所述壳聚糖衍生物是壳聚糖与C₃-C₈直链或支链烯酸环氧丙酯发生自聚接枝反应的产物，再与氨基取代苯硼酸进行开环加成反应得到的，所述壳聚糖衍生物带有活性硼酸基官能团，颗粒大小为1-300nm。

2.根据权利要求1所述的纳米壳聚糖衍生物，其特征在于，所述氨基取代苯硼酸为3-氨基苯硼酸、2-氨基苯硼酸或4-氨基苯硼酸。

3.根据权利要求1所述的纳米壳聚糖衍生物，其特征在于，所述烯酸环氧丙酯为甲基丙烯酸环氧丙酯或丙烯酸环氧丙酯。

4.权利要求1所述的纳米壳聚糖衍生物的制备方法，其特征在于，包括下列步骤：

(1)将壳聚糖溶于含有0.1-20wt％酸的水溶液，再与甲基丙烯酸环氧丙酯或丙烯酸环氧丙酯混合，加入引发剂后进行自聚接枝反应，在反应体系中，壳聚糖的含量为1.5-2.5wt％，甲基丙烯酸环氧丙酯或丙烯酸环氧丙酯的含量为2-10wt％，反应温度为40-100℃，反应时间为0.5-4小时，得到中间体；

(2)将步骤1得到的中间体与氨基取代苯硼酸置于氯化钠和碳酸钠的水溶液中进行开环加成反应，其中，氨基取代苯硼酸的用量是中间体的1-5倍，且占反应体系的2-10wt％，反应温度为50-80℃，pH值为8-12，反应时间4-6小时，降至室温后，过滤，用水洗涤至中性，得到目标产物。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述引发剂为偶氮二异丁腈，正丁基锂，过硫酸钾，硝酸铈铵，硫代碳酸-溴酸钾，二高碘酸铜酸钾，过硫酸氨或硫代硫酸钠中的一种或多种，其中，加入量为反应体系的1-5wt％。

6.根据权利要求5所述的纳米壳聚糖衍生物的制备方法，其特征在于，所述酸为甲酸或乙酸。

7.纳米壳聚糖衍生物在富集和纯化糖基化多肽/蛋白方面的应用，其特征在于，将酶解后的待分析物溶于上样液中，将其加入到权利要求1所述的纳米壳聚糖衍生物纳米材料中进行富集，用上样液将富集糖基化多肽的壳聚糖衍生物洗涤2-5次后再用水快速洗涤1-2次，得到的纳米壳聚糖衍生物，可直接用于MALDI-TOF-MS质谱分析或以洗脱溶液洗脱负载的糖基化多肽/蛋白。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述上样液为含有50mM羟乙基哌嗪乙硫磺酸的0.5M氯化钠水溶液或50mM碳酸氢氨水溶液。

9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述洗脱溶液为含有50％乙腈和2％三氟乙酸的水溶液。