[发明专利]检测头孢类药物的酶联免疫试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及酶联免疫检测技术，具体涉及一种用于检测头孢类药物的酶联 免疫试剂盒，其特别适于鸡肉、猪肉、鱼、虾组织和牛奶样本中头孢类药物残 留的检测。

技术背景

头孢类药物是一种广谱的抗生素，具有优良的抗菌活性和药动学特点，对许 多革兰氏阳性和革兰氏阴性及产β-内酰胺酶的细菌有效。头孢类药物是采用破 坏细菌细胞壁的方式杀死细菌。由于目前使用的检测分析法样本前处理及测定 操作繁琐且费用较高，使推广应用受到限制。

头孢类药物残留量的常规检测方法主要有高效液相色谱(HPLC)、液相色 谱-串联质谱法(LC-MS/MS)、纸色谱等，由于复杂的仪器设备和繁琐的过程以 及对检验人员的高技能要求，不适合现场监控和大量样本的筛查。

发明内容

本发明的目的在于针对上述不足提供一种用于头孢类药物检测的酶联免疫 试剂盒，其操作简单，适合现场大批量样品的筛选。

本发明试剂盒，它含有：

(1)包被有包被原的酶标板(包被原为抗原、抗体或抗抗体)；

(2)酶标记物(为酶标记半抗原、酶标记抗体或酶标记抗抗体)；

(3)头孢类药物特异性抗体工作液(当酶标板上包被抗原且酶标记物为酶标 记抗抗体或酶标板上包被抗抗体且酶标记物为酶标记半抗原时含有)；

(4)头孢噻呋标准品溶液；

(5)底物显色液；

(6)终止液；

(7)浓缩洗涤液；

(8)浓缩复溶液。

本发明所述头孢类药物包括头孢噻呋、头孢曲松、头孢噻肟等具有共 同分子骨架药理活性的药物。

本发明所提供的检测头孢类药物的酶联免疫试剂盒，包括头孢类药物特异性 抗体工作液及预包被包被原的酶标板和酶标记物工作液；所述酶标记物为酶标 记的抗抗体，酶标记头孢类药物半抗原或酶标记头孢类药物特异性抗体；所述 抗抗体为羊抗鼠抗抗体或羊抗兔抗抗体。

所述头孢类药物半抗原是通过头孢噻呋和6-氨基正己酸反应得到的头孢 噻呋正己酸酯半抗原。

所述酶标记物的标记酶为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酯酶，其中优选辣根 过氧化物酶；酶标记的羊抗鼠抗抗体或羊抗兔抗抗体是采用戊二醛法或过碘酸 钠法将标记酶与抗抗体进行偶联得到的；酶标记头孢类药物半抗原是采用混合 酸酐或碳化二亚胺法将标记酶与头孢类药物半抗原偶联得到的；酶标记特异性 抗体是采用戊二醛法或过碘酸钠法将标记酶与特异性抗体偶联得到的，辣根过 氧化物酶可采用现有技术中的多种方法将其与抗抗体进行偶联，如戊二醛法， 过碘酸钠法等，本发明经过长期的劳动创造将过碘酸钠法进行了改良，使其省 时、降低辣根过氧化物酶(HRP)与抗抗体的浓度比率，节省了原材料。

所述头孢类药物特异性抗体可为头孢类药物单克隆抗体或头孢类药物多克 隆抗体；它们均是用头孢类药物半抗原与载体蛋白采用混合酸酐法或碳化二亚 胺法得到的偶联物作为免疫原得到的；所述头孢类药物多克隆抗体可为鼠源、 马源、羊源、兔源或豚鼠源抗体，所述头孢类药物单克隆抗体优选为头孢类药 物鼠单克隆抗体，所述头孢类药物多克隆抗体优选为头孢类药物兔多克隆抗体。

所述头孢类药物单克隆抗体优选为头孢类药物的单克隆杂交瘤细胞株 C-4-3CGMCC No.3111分泌的单克隆抗体。

所述头孢类药物单克隆杂交瘤细胞株C-4-3CGMCC No.3111(分类命名：头 孢类药物的单克隆抗体杂交瘤细胞株)已于2009年05月26日保藏于中国微生 物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区大 屯路，中国科学院微生物研究所，邮编100101)。

以上抗体均可以用头孢类药物半抗原与载体蛋白的偶联物作为免疫原制 备。所述载体蛋白可为鼠血清蛋白、甲状腺蛋白(BCG)、牛血清蛋白、兔血清 蛋白、人血清蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白和纤维蛋白原等常用载体蛋白；所述 头孢类药物半抗原与载体蛋白的偶联物可通过将头孢类药物半抗原和载体蛋白 用混合酸酐法或碳化二亚胺法进行偶联得到。

为了更方便现场监控和大量样本筛查，所述试剂盒还包括头孢噻呋标准品 溶液、显色剂、终止液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液。