[发明专利]生物转化法生产脱氧腺苷的方法无效
| 申请号: | 200910085860.9 | 申请日: | 2009-06-03 |
| 公开(公告)号: | CN101575630A | 公开(公告)日: | 2009-11-11 |
| 发明(设计)人: | 王大然;乔瑞颖;王雅婷 | 申请(专利权)人: | 北京博尔莱生物技术有限公司 |
| 主分类号: | C12P19/40 | 分类号: | C12P19/40;C12R1/225 |
| 代理公司: | 北京纪凯知识产权代理有限公司 | 代理人: | 关 畅;任凤华 |
| 地址: | 100043北*** | 国省代码: | 北京;11 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 生物转化 生产 脱氧 腺苷 方法 | ||
1、一种生产脱氧腺苷的方法,是将瑞士乳杆菌种子液接入发酵培养基中发酵培养,得到粗菌体,将所述粗菌体破碎,制成细胞破碎液,向所述细胞破碎液中加入脱氧胸苷和腺嘌呤进行酶促反应,获得脱氧腺苷;所述腺嘌呤的粒度小于等于10μm。
2、根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述发酵培养基由下列重量份的物质组成:葡萄糖10-20、蛋白胨1-5、麸质粉10-25、柠檬酸胺1-2、磷酸氢二钾1-2、硫酸钠5-10、硫酸锰0.02-0.4和水1000;所述发酵培养的温度为30-42℃,搅拌转速为120-160转/分钟,pH值为6.0-7.5,发酵时间为24-36小时。
3、根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:所述瑞士乳杆菌种子液与所述发酵培养基的体积比为10%-15%。
4、根据权利要求3所述的方法,其特征在于:所述瑞士乳杆菌种子液是按照如下方法获得:将瑞士乳杆菌接种到斜面培养基培养制成斜面菌种,将所述斜面菌种接入发酵培养基中培养获得种子液;所述斜面培养基由下列重量份的物质组成:葡萄糖10-20、蛋白胨10-20、酵母膏3-8、柠檬酸胺1-2、磷酸氢二钾1-2、硫酸钠5-10、硫酸锰0.02-0.4,琼脂15-20和水1000。
5、根据权利要求4所述的方法,其特征在于:所述瑞士乳杆菌接种到斜面培养基培养的温度为30-42℃,pH为6.5-8.0,培养24-48小时。
6、根据权利要求5所述的方法,其特征在于:所述细胞破碎液按照如下方法制备:将所述粗菌体用柠檬酸缓冲液洗涤,然后用pH6.0-7.0磷酸缓冲液悬浮,获得细胞悬浮液,超声破碎所述细胞悬浮液,获得细胞破碎液。
7、根据权利要求6所述的方法,其特征在于:所述柠檬酸缓冲液的pH6.0-7.0;所述磷酸缓冲液的pH6.0。
8、根据权利要求7所述的方法,其特征在于:所述超声条件为功率为300-400瓦,频率为3-5次/10秒,时间为5-15分钟。
9、根据权利要求8所述的方法,其特征在于:所述细胞悬浮液中菌体的质量百分含量为15%-35%。
10、根据权利要求9所述的方法,其特征在于:所述酶促反应的温度为35-50℃。
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