[发明专利]含骺板软骨细胞复方微胶囊制剂及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及含有骺板软骨细胞(或其他软骨细胞)复方微胶囊制剂及其制备和 骺板损伤早闭的治疗。

特别涉及的载体包括海藻酸钠、胶原蛋白、聚赖氨酸、氯化钙、柠檬酸钠溶液。 将所分离的骺板软骨细胞或永生化细胞(或其他软骨细胞)在上述载体的作用下， 通过高压静电微囊发生器根据需要而制得100μm～1000μm的微胶囊(可做成大小 不等规格的微胶囊如100μm～200μm，300μm～500μm等)，保存在培养液或生理 盐水中待注射移植用，此方法目前国内外还没见报道。本发明所用原料具有良好的 生物相容性，较强的机械强度，是一种安全、有效、新型细胞微囊化制剂。可用于 治疗人或动物的骺板损伤早闭。

背景技术

骺板(又称生长板)是位于长骨骺与干骺端之间一层具有纵向生长能力的透明 软骨。负责骨的生长，其组织结构和基质成份呈梯级变化。生理活动和生物学行为 复杂，受全身分泌(包括激素、生长因子)和局部旁分泌及自分泌(多种生长因子) 的调控，内分泌障碍，基质蛋白基因突变，营养代谢障碍，毒性物质，物理因素等 均会导致多种骺板生长发育性疾病，如软骨发育不良，侏儒症等，骺板损伤和感染 会导致骺板部分或全部早闭，畸型发育，严重影响肢体功能和劳动力。

骺板软骨是骨生长最活跃的部位，其发育直接关系到长管状骨的生长发育。正 常时软骨内化必须通过软骨细胞的增殖、肥大、基质钙化以及破骨细胞的清除，吸 收。随着血管和骨母细胞的侵入形成类骨组织，进而钙化骨化形成骨组织。

骺板从解剖上分为三部分：①.由不同软骨细胞组成的软骨骺板；②.骨化的干 骺端；③.骺板周围的Ranvier软骨膜骨化沟，其中软骨骺板分三层，从骨骺端起 依次为储存带，增殖带和肥大细胞带。增殖带是骺板纵向生长的所在，而Ranvier 软骨膜骨化沟则是骺板横向生长的所在，骺板是血供丰富的组织，到了新生儿期骺 板就逐渐形成血运屏障，如果由于骨折、炎症等原因损伤软骨骺板，最终导致血运 屏障的破坏，此时骨骺和干骺端血运侵入骺板。吻合交通，这是骨板形成的基础条 件，首先形成的是纤维血管桥，然后慢慢骨化，如果骺板损伤足够大，允许下是骨 的沉积，骨桥最终形成。

骺板损伤是小儿骨损伤中非常严重的一种，由于生长板的受损而导致肢体进行 性生长停滞及畸形。骺板是儿童骨骼发育的基础，具有特殊的结构和功能，多种原 因可以导致骺板部分或全部的提前闭合。使肢体出现畸形以及引起相应的关节功能 障碍，且随着儿童的生长发育，畸形会逐渐加重。治疗骺板损伤部分早闭的方法很 多，但每一种方法都有其局限性和治疗的不彻底性，目前临床中应用的填充物有自 体脂肪，骨腊，软骨，骨水泥，医用硅胶，明胶海绵以及自体骺板(包括游离带血 管蒂和带肌瓣者)而骺板细胞外培养移植虽有可能解决该问题，但目前仍存在许多 问题。例如：最佳种子细胞，生物环境与骺板软骨细胞之间的关系问题等都有待解 决。当前分子生物学和基因工程的迅猛发展，为骨诱导研究提供了广阔的平台，骨 形态蛋白以及生长因子的研究日益深入，为治疗骺板损伤早闭提供了新的思路，成 人骨髓基质干细胞具有分化潜能，而为人们竞相研究的热点。骺板损伤早闭会导致 肢体严重的畸形和功能障碍，是常见的小儿骨伤病，目前尚缺少能修复损伤骺板组 织结构和恢复其生长功能的理想材料，微囊化细胞技术为骺板缺损早闭提供了新的 治疗手段。

裸露的细胞移植入体内又将遇到强烈的机体免疫排斥反应，微囊则可以依靠膜 的隔离保护功能和选择通透作用，保证生物活性物质扩散通过，抗体或免疫细胞被 载留隔离，从而在生理上避免了个体的免疫排斥，成为解决细胞移植过程免疫排斥 问题的理想手段，因而引起众多研究者的兴趣。1997年，日本0kada等人提出“细 胞制剂”一词，即利用微囊化细胞在生物体内能抵御免疫系统的攻击，维持正常生 理功能，持续不断地释放具有治疗作用的细胞产物——生物活性因子，可形成细胞 性体内长期药物释放系统。至此，微囊化细胞首先在药学方面作为药物释放系统概 念提出。