[发明专利]一种可降低发酵副产物的乙醇发酵工程菌

权利要求书

1.一种可降低发酵副产物的乙醇发酵工程菌，其特征是大肠杆菌的丙酮酸甲酸裂解酶基因和乳酸脱氢酶基因失活，且大肠杆菌中转入了运动发酵单胞菌基因。

2.权利要求1所述的工程菌，所述大肠杆菌是大肠杆菌MG1655菌株，所述运动发酵单胞菌基因是运动发酵单胞菌的乙醇脱氢酶基因II和丙酮酸脱羧酶基因。

3.权利要求1所述的工程菌的制备方法，步骤为：

1)大肠杆菌根据Red重组系统分别突变其丙酮酸甲酸裂解酶基因和乳酸脱氢酶基因，得到了发酵时不产生乳酸和甲酸的突变株；

2)在步骤1)所述突变株中转入运动发酵单胞菌的乙醇脱氢酶基因II和丙酮酸脱羧酶基因，该两个基因在强启动子Ptac启动下发生共表达。

4.权利要求3所述的工程菌的制备方法，所述大肠杆菌是大肠杆菌MG1655菌株。

5.权利要求3所述的工程菌的制备方法，所述转入运动发酵单胞菌的乙醇脱氢酶基因II和丙酮酸脱羧酶基因的方法是：将包含有SD序列的运动发酵单胞菌乙醇脱氢酶基因和丙酮酸脱羧酶基因经过PCR克隆后连接到pGEM-T easy载体上，经过酶切后置于含有可被大肠杆菌RNA聚合酶高效识别的强启动子Ptac的表达载体pZY507上，使得乙醇脱氢酶基因和丙酮酸脱羧酶基因在大肠杆菌中发生共转录和共表达。

6.权利要求1或2所述的工程菌在用五碳糖和六碳糖做底物发酵生产乙醇中的应用。

7.一种可降低发酵副产物的乙醇发酵工程菌突变株，其特征是将丙酮酸甲酸裂解酶和乳酸脱氢酶基因突变，同时转入运动发酵单胞菌基因。

8.权利要求7所述的突变株的制备方法，其特征是通过Red重组系统突变大肠杆菌MG1655菌株的丙酮酸甲酸裂解酶基因和乳酸脱氢酶基因，经过筛选后得到重组子，挑选生长迅速的单菌落转入运动发酵单胞菌基因进行发酵培养。