[发明专利]一种新的检测血清样本中SARS抗体的方法和产品

说明书

技术领域

本发明涉及一种新的检测血清样本中SARS抗体的定量检测方法和产品及其制备方法。

背景技术

在2002年冬到2003年春肆虐全球的严重急性呼吸综合征(Severe AcuteRespiratory Syndrome，SARS，传染性非典型肺炎)的病原体SARS冠状病毒(SARS-CoV)就是冠状病毒科，冠状病毒属中的一种。冠状病毒是成人普通感冒的主要病原之一，儿童感染率较高，主要是上呼吸道感染，一般很少波及下呼吸道。另外，还可引起婴儿和新生儿急性肠胃炎，主要症状是水样大便、发热、呕吐，每天可拉10余次，严重者甚至出现血水样便，极少数情况下也引起神经系统综合征。SARS-CoV为单股正链RNA病毒，属巢状病毒目，冠状病毒科，冠状病毒属。根据血清型，冠状病毒属主要分为3个Group，包括多种哺乳动物冠状病毒和鸟感染性支气管炎病毒。SARS-CoV是引起人类严重疾病的第一个冠状病毒。SARS-CoV主要结构蛋白有：S蛋白(刺突糖蛋白)、M蛋白(跨膜蛋白)、E蛋白(包膜蛋白)、N蛋白(核壳体蛋白)。N蛋白是其中最稳定的一个结构蛋白，也是感染过程中最丰富的病毒蛋白，证实是理想的诊断抗原。

免疫学方法酶联免疫实验(ELISA)中利用抗原与抗体特异性反应来检测抗原或抗体主要有由双抗原夹心测抗体、双抗体夹心测抗原、竞争法、间接法等。间接法测抗体的原理是特异性抗原结合到固相载体上，然后和待检血清中的相应抗体结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标记抗体与免疫复合物中的抗体结合形成酶标记抗体-抗体-固相抗原复合物，加底物显色，判断抗体含量。

悬浮芯片(suspension array)也称液相芯片，是20世纪70年代美国Luminex公司研制出的新一代生物芯片技术，利用带编码的微球体作为载体，流式细胞仪作为检测平台，对核酸、蛋白质等生物分子进行大规模测定。目前，该技术已广泛应用于免疫分析、核酸研究、酶学分析、抗体筛选及受体与配体的识别分析等领域。

目前发展的悬浮芯片主要是对于细胞因子的检测。但是悬浮芯片是否能够检测人血清中的SARS抗体，尚缺乏模型和评价。

发明内容

本发明涉及一种新的检测血清中SARS抗体的蛋白悬浮芯片，该芯片包括：编码微球，作为包被微球抗原的SARS-CoV N蛋白，生物素标记的羊抗兔IgG作为检测抗体，链亲和素-藻红蛋白和适宜的缓冲溶液，所述编码微球优选是044号编码微球。所述的SARS-CoV N蛋白例如是重组SARS-CoV全长核蛋白-N32(aa1-422)和重组SARS-CoV核蛋白片段N13(aa221-422)，均经镍亲和柱纯化。

本发明提供上述检测SARS抗体的蛋白悬浮芯片的制备方法，其特征在于，在相关缓冲溶液中，将编码微球包被SARS-CoV N蛋白、生物素标记的检测抗体为羊抗兔IgG、链亲和素-藻红蛋白(SA-PE)，所述编码微球优选是044号编码微球，所述的SARS-CoV N蛋白例如是重组SARS-CoV全长核蛋白-N32(aa1-422)和重组SARS-CoV核蛋白片段N13(aa221-422)，均经镍亲和柱纯化。

本发明提供一种SARS抗体的蛋白悬浮芯片定量检测方法，该方法采用间接法检测抗体的免疫学检测原理，其特征在于，在检测过程中所有反应可在96孔滤板上或在微量离心管中进行，其中包括下列步骤：(1)每孔或管中加入含有已包被捕获抗原，即SARS-CoV N蛋白包被的编码微球的工作溶液，用清洗液清洗；(2)加入待测血清样品，孵育后清洗；(3)加入用生物素化的检测抗体，孵育后清洗；(4)加入链亲和素-藻红蛋白(SA-PE)，孵育后清洗，(5)加入检测缓冲液后混匀，(6)用悬浮芯片系统读取MFI数值(即平均荧光强度)并分析数据判定检测结果阴性或阳性。

本发明还提供一种检测血清样品种SARS抗体的蛋白悬浮芯片定量检测方法，其特征在于，该方法包括下列步骤：(1)加入的阳性检测样品或标准品经4倍梯度倍比系列稀释，(2)制作样品浓度对应MFI值的剂量-反应标准曲线，(3)用分析软件拟合剂量-反应曲线和方程，(4)可根据剂量-反应曲线判断动态检测范围，未知浓度样品可根据剂量-反应方程计算出样品检测浓度，还可判定方法检测限。