[发明专利]一种改进的促进小鼠克隆胚胎发育的培养方法

权利要求书

1.一种用于提高小鼠克隆胚胎发育率的方法，其特征在于，所 述用于提高小鼠克隆胚胎发育率的方法为一种小鼠克隆胚 胎的体外连续培养方法，即D培养法，所述方法包括以下步 骤：

重构胚胎经激活后，在不含乙二胺四乙酸和谷氨酰胺的 培养基中培养至所述克隆胚胎发育到二细胞期，然后换成 KSOM培养基进行培养，培养至所述克隆胚胎发育到囊胚，

其中，所述不含乙二胺四乙酸和谷氨酰胺的培养基选自 M16培养基和不含乙二胺四乙酸和谷氨酰胺的CZB培养基。

2.一种用于提高小鼠克隆胚胎发育率的培养体系，其特征在于， 所述培养体系由用于在重构胚胎激活后将所述克隆胚胎培养 发育到二细胞期的M16培养基以及用于将所述二细胞期的克 隆胚胎培养发育到囊胚的KSOM培养基构成。

3.一种用于提高小鼠克隆胚胎发育率的培养体系，其特征在于， 所述培养体系由用于在重构胚胎激活后将所述克隆胚胎培养 发育到二细胞期的不含乙二胺四乙酸和谷氨酰胺的CZB培养 基，称为CZB-EG，以及用于将所述二细胞期的克隆胚胎培养 发育到囊胚的KSOM培养基构成。

4.一种用于提高小鼠核移植胚胎干细胞建系效率的方法，其特 征在于，重构胚胎经激活后，在M16培养基或不含乙二胺四 乙酸和谷氨酰胺的CZB培养基中培养至克隆胚胎发育到二细 胞期，然后换成KSOM培养基进行培养，培养至所述克隆胚 胎发育到囊胚，建立核移植胚胎干细胞系。

5.一种利用权利要求2或3所述的培养体系获得小鼠核移植胚胎 干细胞的方法，所述方法包括：

重构胚胎在激活液中激活之后，用所述培养体系进行体 外培养，即在M16培养基或不含乙二胺四乙酸和谷氨酰胺的 CZB培养基中培养至克隆胚胎发育到二细胞期，然后换成 KSOM培养基进行培养，发育到囊胚阶段时，分离核移植胚 胎干细胞。

6.根据权利要求2或3所述的培养体系在获得核移植胚胎干细 胞、克隆动物中的应用，其中，所述核移植胚胎干细胞是小鼠 核移植胚胎干细胞，所述克隆动物是克隆小鼠。